166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására

49 166686 50 43. H-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys-(BOC)-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2. hidroklorid 2 g, a 42. pontban nyert terméket 150 ml dimetilformamidban oldunk és hidrálunk, 2,5 óra múlva 0,3 ml 4,844 n sósavat csepegtetünk hozzá. 21 óra múlva leszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A maradékot 25 ml dimetilformamidban oldjuk, 0,73 ml 1,0 n sósavat adunk hozzá, 40 ml etilacetáttal elkeverjük, és 0°-ra hűtjük. A csapadékot leszűrjük, terc-butanol-víz elegyben felvesszük és liofilizáljuk. [a]g" = — 25,2° (c = 2, dimetilformamidban). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint Rf6 = 0,32. 44. BOC-Ser-Thr-Obzl 73 g BOC-Ser-OH diciklohexilammóniumsó 500 ml metilénkloridos oldatához 47 g H-Thr-OBzl. hidroklorid 300 ml metilénkloridos oldatát adjuk, 10 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd — 5°-ra hűtjük. Ezen a hőmérsékleten 40,1 g diciklohexilkarbodiimid 90 ml metilénkloridos oldatát csepegtetjük hozzá. 3 órán át — 5°-on, majd egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A diciklohexilkarbamid és a diciklohexilamin-hidroklorid leszűrése után az oldatot kirázzuk, mégpedig háromszor 0,1 n sósavval, kétszer 20%-os nátriumkloridoldattal, egyszer 10%-os nátriumhidrogénkarbonátoldattal és kétszer 20%-os nátriumkloridoldattal, majd nátriumszulfát felett szárítjuk. Az oldatot kb. 600 ml-re szűkítjük, 5°-ra hűtjük, és leszűrjük a további diciklohexilkarbamidot. Szárazra párolás után a maradékot etilacetát-hexán elegyből átkristályosítva tisztítjuk. Op.: 110—111°, [a]D

= -8,5° (c=2, dimetilformamidban); Rf2

= 0,33 (szilikagélen). 45. H-Ser-Thr-Obzl. trifluoracetát 65,7 g BOC-Ser-Thr-OBzl vegyületet 100 nil 90%-os trifluorecetsavban oldunk, és az oldatot egy órán át 20°-on tartjuk. Keverés közben 1000 ml száraz éterhez csepegtetjük, egy óráig keverjük, és egy éjszakán át — 10°-on állni hagyjuk. A keletkezett csapadékot leszűrjük, háromszor száraz éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk nátriumhidroxid felett. Op.: 128—129°; Rf7 =0,65; R

f4

=0,50 (szilikagélen). 46. BOC-Leu-Ser-Thr-OBzl 52,5 g H-Ser-Thr-OBzl trifiuoracetátot 145 ml dimetilformamidban oldunk, és 0°-on 48,0 g BOC-Leu-ONP oldatot adunk hozzá. Ezek után 21 ml trietilamint és 0,75 ml jégecetet adunk hozzá. A reakcióelegyet 3 órán át 0°-on és egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. 2,1 liter etilacetát hozzáadása után az oldatot kirázzuk, mégpedig vízzel, kétszer 0,1 n sósavval, kétszer 10%-os nátriumklorid-oldattal, nyolcszor 20%-os káliumkarbonátoldattal, kétszer 10%-os és egyszer 30%-os konyhasóoldattal. Az oldatot nátriumszulfát felett szárítjuk, majd kb. 1,4 literre sűrítjük be. Egy éjszaka alatt hűtőszekrényben kikristályosodik a tripeptid, Op.: 114—116°, [a]D

= -14° (c=2, dimetilformamidban), Rf2

= 0,25 (szilikagélen). 47. H-Leu-Ser-Thr-OBzl. trifluoracetát 46,1 g BOC-Leu-Ser-Thr-OBzl vegyületet 92,5 ml 90%-os trifluorecetsavban oldunk, és 1 órán át 20°-on 5 állni hagyjuk. Ezután keverés közben 925 ml száraz étert adunk hozzá, egy órán át 0°-on keverjük, és egy éjszakán át — 10°-on állni hagyjuk. A keletkezett csapadékot leszűrjük, háromszor száraz éterrel mossuk, és vákuumban nátriumhidroxid felett szárítjuk. Op.: 10 168—171°, Rf7

= 0,80 (szilikagélen). 48. BOC-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl 15 20,8 g BOC-Asn-OH vegyületet szuszpendálunk 208 ml acetonitrilben, 22,7 g Woodward K reagenst adunk hozzá, és 30 percig 20°-on keverjük. Ezután keverés közben 12,6 ml trietilamint csepegtetünk hozzá úgy, hogy a hőmérséklet + 32° fölé ne emelkedjék, 20 majd 20°-ra hűtjük, és ezen a hőmérsékleten még 50 percig keverjük. A teljesen tiszta oldatot 0°-ra hűtjük, és 39,1 g H-Leu-Ser-Thr-OBzl. trifluoracetát és 10,5 ml trietilamin 257 ml dimetilformamidos, ugyancsak 0°-ra hűtött oldatát adjuk hozzá. A rövidesen megdermedő 25 reakcióelegyet egy éjszakán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd — 10°-ra hűtjük, és még két óráig ezen a hőmérsékleten keverjük. A kristályos csapadékot leszivatjuk, és a tetrapeptidszármazékot egyszer acetonitrillel, egyszer etilacetáttal és háromszor vízzel kloridmentesre 30 mossuk. A keletkezett terméket 370 ml dimetilformamidból, 3,7 ml jégecetből és 370 ml acetonitrilből átkristályosítjuk. Op.: 225—226°; [a]D

= -36° (c=2, dimetilformamidban), Rf6

= 0,85 (szilikagélen). 35 49. H-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl. trifluoracetát 32 g BOC-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl vegyületet 192 ml 90%-os trifluorecetsavban oldunk, és 45 percig 20°-on 40 állni hagyunk. Ezután az oldatot kb. 40 ml-re pároljuk be, keverés közben 400 ml étert adunk hozzá, és 20 percig 35°-on keverve visszafolyatás közben forraljuk. Ezután a kristályszuszpenziót — 10°-ra hűtjük, és egy éjszakán át — 10°-on állni hagyjuk. A csapadékot le-45 szűrjük, háromszor éterrel mossuk, és vákuumban nátriumhidroxid felett szárítjuk. Op.: 125—127°; Rf4

= 0,35 (szilikagélen). 50 50. BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl 26,3 g H-Asn-Leu-Ser-Thr-OBz). trifluoracetát vegyületet 100 ml dimetilformamidban oldunk, 0°-ra hűtjük, 55 egymásután 7,5 ml trietilamint, 0,54 ml jégecetet adunk hozzá, majd 14,4 g BOC-Gly-ONP 100 ml dimetilformamidos oldatát, szobahőmérsékleten keverjük, míg az elegy megdermed, és két napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután keverés közben 500 ml etilacetátot 60 adunk hozzá, és egy éjszakán át — Í0°-on állni hagyjuk. A csapadékot leszűrjük, kétszer etilacetáttal és kétszer éterrel mossuk, fél óráig 200 ml vízzel keverjük, leszűrjük, vízzel mossuk, és vákuumban szárítjuk. Op.: 227—228°; [a]D

= —23° (c=2, dimetilformamidban); 65 Rf9

= 0,50 (szilikagélen). 25