166650. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lipáz előállítására mikrobiológiai úton

3 166650 4 az ismert lipáztermelő törzsekét; zsír-adalékot tartalmazó táptalajon az ismert törzsek gyakorlatilag egyáltalán nem termelnek lipázt, míg az új törzs lipáztermelése ilyen táptalajon sokszorosan meghaladja az ismert törzsekét. Az általunk elkülönített új Chromobacterium viscosum törzs az alábbi taxonómiai tulajdonságokat mutatja: a) Növekedés (1) Mikroszkópos megfigyelés: Hossz: Alak: Mozgékonyság: Spórák: (2) A telep tulajdonságai Felület: 0,6—12 mikron kis pálcák gyenge nincs spóraképzés. fény-Szín: Pigment: kerek, konvex, lő, viszkózus világos sárgásbarna nincs pigmentképződés. Vizsgálati anyagként, ill. közegként mannitot és élesztőkivonatot és agart, glükózt és peptont, tápagart és burgonya kivonatot és agart használunk. (3) Növekedési tulajdonságok: Bouillon: van növekedés Bouillon agar: van növekedés Glükóz bouillon agar: jó növekedés Zselatin-táptalaj: van növekedés Folyékony pep ton: van növekedés Burgonya-táptalaj: van növekedés Lakmusz-tej: van növekedés, savképződéssel b) Fiziológiai tulajdonságok (1) Optimális növekedési feltételek: pH: 6,5 hőmérséklet: 28 C° aerob vagy anaerob: aerob (2) Növekedési feltételek: pH: 5,5—9,0 hőmérséklet: 5—37 C° aerob vagy anaerob: aerob (3) Gram-színezés: negatív (4) sav-érzékenység: negatív (5) metilvörös-próba: negatív (6) Voges—Proskauer reakció: negatív (7) indolképződés: negatív (8) hidrogénszulfid-termelés: negatív (9) ammóniaképződés: pozitív (10) nitrát-redukció: pozitív (11) katalázképződés pozitív (12) zselatin-folyósítás: pozitív (13) kazein-folyósítás pozitív és negatív (14) keményítő-hidrolízis negatív (15) citromsav-hasznosítás pozitív (16) tej-koagulálás negatív (17) lakmusz-redukció pozitív (18) metilénkék-redukció negatív (19) ammóniumsó- és karbamidhasznosítás negatív c) Szénforrás-hasznosítás arabinóz pozitív xilóz negatív 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 glükóz pozitív mannóz pozitív fruktóz pozitív galaktóz pozitív laktóz negatív maltóz negatív szacharóz pozitív trehalóz pozitív raffmóz negatív szorbit negatív inozit negatív glicerin negatív szálicin negatív inulin negatív dextrin negatív keményítő negatív cellulóz negatív További vizsgálatokat végeztünk a baktérium osztályozásának meghatározása céljából, és megállapítottuk, hogy taxonómiai tulajdonságai alapján a Chromobacterium genus-ba tartozik. Ezt az azonosítást S.T. Cowan és K. J. Steel: „Manual for the Identification of Medical Bacteria" c. könyve, Cambridge Univ. Press, 1965 megfelelő fejezeteinek alapján végeztük. A baktérium további taxonómiai tulajdonságainak az A.T.C.C.-tól (American Type Culture Collection) beszerzett, Chromobacterium genus-ba tartozó tenyészettípus hasonló tulajdonságaival való további összehasonlítása alapján megállapítottuk, hogy a baktérium erősen hasonlít a Chromobacterium viscosum-hoz. Megállapítottuk, hogy a baktérium viselkedése a Chromobacterium viscosum A.T.C.C. 6918 viselkedésétől az alábbiakban tér el: Talált Chromobacterium baktérium viscosum kazein-folyósítás pozitív és negatív pozitív citromsav-hasznosítás pozitív negatív arabinóz-hasznosítás pozitív negatív laktóz-hasznosítás negatív pozitív rafönóz-hasznosítás negatív pozitív szorbit-hasznosítás negatív pozitív dextrin-hasznosítás negatív pozitív Az általunk talált baktérium tehát eltér a Chromobacterium viscosum-tól, azonban megállapítottuk, hogy annak lényeges taxonómiai tulajdonságai, különösen számos közegen a tenyésztési tulajdonságai, fiziológiai tulajdonságai és hasonlók lényegileg hasonlók voltak az említett ismert baktériuméihoz. Ezért úgy döntöttünk, hogy az általunk talált baktérium a Chromobacterium viscosum egy változata, és Chromobacterium viscosum var. paralipolyticum-nak neveztük el. Ezt a baktériumot letétbe helyeztük a Japán Kormány Ipari és Kereskedelmi Minisztétiuma Ipari és Technológiai Tanácsának Fermentációs Intézetében (Hakko Kenkyusho, Kogyo Gijutsuin, Tsusho—Sangyosho, Chiba-i telephelyén), „Ko-Hatsu-Ken-Kin-Ki No. 137" letéti számmal. A találmány célja olyan eljárás biztosítása, melynek segítségével nagy hatékonyságú lipázt lehet előállítani. 2