166646. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino-3-metil-CEF-3-EM-4-karbonsav és észtereik előállítására

11 166646 12 4. táblázat fol ytatása Átalakulás, % Mikroorganizmus 1. termék 2. termék Talaromyces luteus Verticillium theobromae Nocardia mexicana Streptomyces lavendulae IFOIFOIFOIFO-6896 -6669 -3927 -3145 18 15 21 25 12 6. példa Griphosphaeria nivalis IFO—7436 4 napos törzstenyészetének 30 térfogatrésznyi mennyiségét 1,000 térfogatrész pH = 6 tenyésztőközegbe oltjuk, mely 3% szacharózt, 0,2% nátrium-nitrátot, 0,1% kálium-hidrogénfoszfátot, 0,05% kálium-kloridot, 0,05% magnézium-szulfátot, 0,001% vas(II)-szulfátot és 0,05% fenoxiecetsavat tartalmaz. A tenyésztő közeget rázás közben 28 C°-on 4 napon át inkubáljuk, majd 3,7 súlyrész 7-fenoxiacetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav-metil-észter 20 térfogatrész acetonnal készült oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet további 16 órán át rázzuk 28 C°-on. A reakcióelegy egy részét vékonyrétegen kromatografáljuk metanol-aceton 1 : 1 arányú elegyével aluálva, annak igazolására, hogy a 0,95 Rf

értékű 7-fenoxiacetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav-metilészter szubsztrát eltűnt és helyette majdnem kvantitatív mennyiségben 7-amino-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav keletkezett. A reakcióelegyet leszűrjük a micélium eltávolítása céljából, a szűrletet koncentráljuk és oszlopkromatográfiával tisztítjuk, amikoris 1,9 súlyrész kívánt terméket kapunk, mely 240—242 C°-on olvad bomlás közben. Hozam: 87%. 7. példa Az 5. táblázatban felsorolt élesztő törzsek mindegyikének 4 napos ferde agaros tenyészetéből egy oltókacsnyit 5% szacharózt, 0,025% kálium-dihidrogénfoszfátot, 0,1% kalcium-nitrátot, 0,025% magnézium-szulfátot, 0,012% kálium-kloridot és csapvizet tartalmazó pH = 6 tápközeg 30 ml-ébe oltunk. A tenyésztést 28 C°-on rázás közben 48 órán át folytatjuk. A tenyésztő közeghez 100 mg 7-fenoxiacetamido-3-metil-cef-3-em-4--karbonsav-metilészter 1 ml acetonnal és 7 ml 0,25 M foszfát pufferrel (pH = 7) készült oldatát adjuk, és a rázást tovább folytatjuk 28 C°-on 16 órán át a reakció lefolytatása céljából. A kapott termékek, vagyis a 7--amino-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav (1. termék) vagy metil észtere (2. termék) kitermelését a megfelelő törzseknél a következő táblázatban tüntetjük fel. 5. táblázat Mikroorganizmus 1. termék 2. termék Mikroorganizmus mg Rhodotorula glutinis IFO—0756 Cryptococcus albidus IFO—0940 Nadsonia elongata IFO—0665 Saccharomycodes ludwigii IFO—1266 — 40 50 30 10 8. példa A 6. táblázatban felsorolt törzsek mindegyikének 4 napos, az 5. példa szerint előállított 30 ml-nyi tenyészetéhez 7 ml 0,25 M foszfát puffert (pH =7,0) és 100 mg 7-fenoxi-acetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav-benzilészter 1 ml acetonnal készült oldatát adjuk. A reakcióelegyet 28 C°-on 16 órán át keverjük a reakció lefolytatása céljából. A kapott 7-amino-3-metil-cef-3--em-4-karbonsav (1. termék) és benzil észtere (2. termék) kitermelését a megfelelő átalakulásra számítva a 6. táblázatban tüntettük fel. 6. táblázat Mikroorganizmus 1. termék 2. termék Fusarium solani Diaporthe phaseolorum IFO—8509 IFO—6707 35% 45% 16% 11% 9. példa A 7. táblázatban felsorolt törzsek 5. példa szerinti módon kapott 4 napos tenyészetének 30 ml-éhez 7 ml 0,25 M foszfát puffert (pH =7,0) és 100 mg 7-fenoxiacetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav-metiltiometilészter oldatát adjuk. A reakcióelegyet 28 C°-on 16 órán át rázzuk a reakció lefolytatása céljából. A kapott 7-amino-3-metil-cef-3--em-4-karbonsav (1. termék) és/vagy metiltiometil észterének (2. termék) kitermelését a 7. táblázatban tüntettük fel. 10 15 20 25 30 35 40 45 10. példa Escherichia intermedia AHlí—1412 törzs sejtjeivel beoltunk 50 ml 7,0 pH-jú vizes tápközeget, amely 1% peptont, 1% húskivonatot, 0,5% nátriumkloridot és 50 0,3% nátriumfenilacetátot tartalmaz, azután a kultúrát 18 órán át rázzuk, 24 C° hőmérsékleten. Ezután a sejteket 4 C° hőmérsékleten centrifugálással elkülönítjük és 5 ml 0,8 pH-jú 0,1 mólos káliumfoszfát pufferben szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz hozzáadunk 1 ml 55 hasonló foszfátpuffert, amely 60 mg 7-fenil-acetamido-3-hetil-cef-3-em-4-karbonsavat tartalmaz, és a keveréket 5 órán át 37 C°-on inkubáljuk, miközben a pH-t 0,1 n NaOH időnkénti hozzáadásával 7,0 értéken tartjuk. A 7-amino-3-metil-cef-3-ern-4-karbonsav hozamát 60 a fenilacetilkloriddal való fenilacetilezés után tapasztalt antimikrobiális aktivitás (1. kísérlete) alapján és az L. P. Marrelli által leírt kolorimetriás módszerrel (2. kísérlet) határoztuk meg [Journal of the Pharmaceutical Science, 57, 2172—2173 (1968)]. Az eredménye-65 ket a 8. táblázatban mutatjuk be. 7. táblázat Mikroorganizmus 1. termék 2. termék Aspergillus brevipes Fusarium oxysporum Diaporthe phaseolorum IFO—5821 IFO—4469 IFO—6707 35°/ JJ/ o 45% 37% 6