166646. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino-3-metil-CEF-3-EM-4-karbonsav és észtereik előállítására
9 166646 10 4. példa Egy oltókacsnyi Escherichia coli IFO—3210 törzset 1% peptont, 1% húskivonatot, 0,5% nátrium-kloridot és 0,3% fenilecetsavat tartalmazó 50 térfogatrész vizes, pH = 7,0 közegbe oltunk és rázás közben 28 C°-on 24 órán át tenyésztjük törzstenyészet előállítása céljából. Ezt a törzstenyészetet ezután a fenti összetételű 500 térfogatrész vizes tápközegbe oltjuk és az egész reakcióelegyet 28 C°-on 24 órán át rázzuk. A táptalajt leszűrjük a sejtek összegyűjtése céljából, vízzel mossuk és 50 térfogatrész desztillált vízben szuszpendáljuk. A sejtszuszpenzióhoz 2 súlyrész 7-fenilacetamido-3--metil-cef-3-em-4-karbonsav vizes oldatának 50 térfogatrésznyi mennyiségét adjuk. A reakcióelegyet 37 C°-on 3 órán át keverjük, a pH-t 0,1 N NaOH adagolásával 7,0 értéken tartva. 30 perces időközökben a reakcióelegyből mintát veszünk, melynek 260 mjji-nál lemérjük az abszorpcióját. Ugyanilyen mennyiséget szilikagélvékonyrétegen kromatografálunk etilacetát-ecetsav-víz 50: 5: 4 arányú elegyével futtatva. Az eredmények azt mutatják, hogy a 0,50 Rf értékű szubsztrát 3 órás reakció alatt teljesen eltűnik és 0,05 Rf értékű 7-amino-3--metil-cef-3-em-4-karbonsavvá alakul. A reakcióelegy 260 mfA-nál mért abszorpciója nem változik lényegesen a reakció alatt. A reakcióelegyet leszűrjük a sejtek eltávolítása céljából, a szűrleteket egyesítjük a sejtek mosófolyadékával. Az egyesített oldatot Amberlite XAD—2 oszlopon kromatografáljuk, desztillált vízzel eluálva. Az eluátumok liofilizálásával 1,0 súlyrész tiszta 7-amino-3-metil-cef-3--em-4-karbonsavat kapunk por alakjában, mely a hiteles mintával összehasonlítva jó egyezést mutat olvadáspont, specifikus forgatás, infravörös spektrum, mágneses magrezonancia spektrum és ultraibolya spektrum tekintetében. Hozam: 77,5%. 5. példa Az alább felsorolt mikroorganizmusok 7 napos ferdeagaros tenyészetét 30 ml 3% szacharózt, 0,2% nátrium-nitrátot, 0,1% káliumhidrogénfoszfátot, 0,05% kálium-kloridot, 0,05% magnézium-szulfátot, 0,001% vas(II)-szulfátot, 0,5% élesztőkivonatot, 0,5% peptont, 0,5% kukoricalekvárt és 0,05% fenoxiecetsavat tartalmazó pH = 6 tenyésztőközegbe oltunk. A tenyésztő közegeket rázás közben 28 C°-on 4 napon át inkubáljuk, majd 100 mg 7-fenoxiacetamido-3-metil-3-cefem-4--karbonsav-metilészter 1 ml acetonnal és 7 ml 0,25 M foszfát pufferrel (pH = 7,0) készült oldatát adjuk hozzá. A reakciót rázás közben 28 C°-on 16 órán át folytatjuk. A terméket vagy termékeket a törzsek mindegyikénél a 4. táblázatban tüntetjük fel, ahol a számok a kívánt 7-amino-3-metil-3-cefem-4-karbonsav (1. termék) és/ vagy a 7-amino-3-metil-3-cefem-4-karbonsav-metilészter (2. termék) megfelelő átalakulását jelzik. 4. táblázat Átalakulás, % Mikroorganizmus 1. 2. termék termék Aureobasidium pullulans IFO—4464 _ 20 Arthrinium phaeospermum IFO—6574 — 55 Anthracobia melaloma IFO—6985 —• 22 Ascotricha chartarum IFO—6310 15 — Aspergillus parasiticus IFO—4082 10 35 Aspergillus brevipes IFO—5821 — 64 Acremonium potronii IFO—5706 — 18 Actinomucor elegáns IFO—4022 — 15 Alternaria longipes IFO—6149 — 46 Aegerita Candida IFO—6988 — 23 Beauveria bassiana IFO—4848 — 13 Botryotinia fuckeliana IFO—5365 — 21 Byssochlamys fulva IFO—6307 — 17 Botryosphaeria ribis chromogena IFO—4837 — 17 Cunninghamella echinulata IFO—4445 — 50 Colletotrichum dematium IFO—6703 13 — Cylindrocephalum aureum IFO—6807 — 45 Cercospora kikuchii IFO—6711 — 23 Ceratocystis piceae IFO—7644 15 — Ceratocystis soerulescens IFO—8668 12 — Cephalosporium mycophilum IFO—6615 33 — Chaeromium elatum IFO—6554 — 25 Chaetomium anahelicinum IFO—8389 10 — Chrysosporium verrucosum IFO—8279 — 18 Cephaloascus fragrans IFO—7785 11 — Corynespora smithii IFO—8162 — 22 Cylindrocladium penicilloic es IFO—6784 — 19 Cylindrocarpon willkommii IFO—5995 — 19 Cladosporium eladosporioides IFO—6371 — 20 Coniochaeta tetraspora IFO—8526 — 18 Dactylaria mycophila IFO—6785 — 15 Diaporthe phaseolorum IFO—6707 65 25 Daedaleopsis styracina IFO—4910 — 55 Fusarium oxysporum IFO—4469 — 75 Fusarium roseum IFO—8503 18 — Fusarium solani IFO—8509 20 25 Griphosphaeria nivalis IFO—7444 — 65 Gibberella zeae IFO—7160 — 60 Glomerella cingulata IFO—5257 12 13 Isaria kogane IFO—5299 — 45 Microascus desmosporus IFO—6761 — 40 Neurospora sitophila IFO—4596 — 55 Pestalotiopsis funerea IFO—5427 — 52 Pleospora herbarum IFO—6125 — 42 Pyrenophora graminea IFO—7507 — 47 Pseudoplea trifolii IFO—6681 — 21 Papularia sphaerosperma IFO—6574 — 45 Pellicularia filamentosa IFO—6523 — 18 Rosellinia necatrix IFO—6323 — 20 Septoria glycines IFO—7346 — 45 Sclerotium delphinii IFO—7337 — 55 Sartorya fumigata IFO—5866 — 50 Trichometasphaeria turcica IFO—6358 — 13 Taphrina cerasi IFO—0675 — 15
