166543. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baktériumellenes hatású 3-(tetrazolo-piridazinil)-tiometil-7-acilamino-CEF-3-EM-4-karbonsav-származékok előállítására

31 166543 32 13. példa A következő híg iszapot állítjuk elő: 2,19 g nátrium-formaldehid-biszulfit (2 ekvivalens). 3,5 g 7-[ß-(o-amino-metil-fenil)-propionamido]-3--(tetrazolo[4,5-6]piridazin-6-il-tio-metil)-cef-3-em-4-karbonsav ikerion (100—200 mesh). 25 ml víz (a térfogat változhat). 14 ml 30%-os izopropanolos nátrium-2-etil-hexanoát. 0,5 óráig 24 C°-on élénken keverve a fenti anyagok csaknem feloldódnak. Az elegy hőmérsékletét gyorsan 40—43 C-ig emeljük. Körülbelül 2 óra múlva gyorsan lehűtjük 20—23 C°-ra. Az oldatot leszűrjük a fel nem oldódott anyag eltávolítása céljából (az oldat előállításától számított 2 órán belül). Az oldathoz (pH 3) gyors keverés közben, körülbelül 5 perc alatt hozzáadunk 600 ml abszolút etanolt (más alkohol is használható, így vízmentes izopropanol). A 7-(o-amino-metil-fenil-propionamido)-3-(tetrazo-lo[4,5-b]piridazin-6-il-tio-metü)-cef-3-em-4-karbonsav-nátriumsó di-metánszulfonsav-nátriumsója amorf csapadék formájában válik ki. Az elegyet 5 percig keverjük. A csapadékot szűréssel tömörítjük, 60 ml etanollal (vagy izopropanollal) mossuk és 50 C°-on 24 óráig vákuumban szárítjuk. Kitermelés körülbelül 4 g. A termék pH 7-nél vízben oldódik, legalább 200 mg/ml arányban. Az oldat legalább 2 óráig stabil szobahőmérsékleten; hígabb oldatok tovább is stabilak. A termék ugyanazokra a baktériumokra hat, mint a kiindulási ikerionvegyület és biológiailag teljes mértékben hatásos, akár visszaalakul hidrolízis után ikerionná, akár nem. 14. példa 7-{ß-[o-N,N-bisz(Natrium-szulfometil)-ammo-metil-fenil]-propionamido}-3-(tetrazolo[4,5-b]piridazin-6-il-tio-metil)-cef-3-em-4-karbonsav-nátriumsó. A) Hidroxi-metánszulfonátból kiinduló eljárás 1,95 mM 7-[ß(o-amino-metil-fenii)-propionamido]-3--(tetrazolo[4,5-b]piridazin-6-il-tio-metil)-cef-3-em-4--karbonsav, 1,52 g (10 mM) nátrium-hidroxi-metánszulfonát monohidrát, 6 ml (6 mM) ÍM etil-acetátos nátrium-2-etil-hexanoát, 10 ml izopropanol és 10 ml víz elegyét szobahőmérsékleten 3—5 óráig keverjük. A képződött oldatot 1 g aktív szénnel kezeljük és keverés közben hozzáadjuk 300 ml abszolút etanolhoz. Az elegyet szobahőmérsékleten 30 percig keverve kristályos terméket kapunk, melyet szűréssel összegyűjtünk, 3 X 50 ml abszolút etanollal mosunk és foszfor-pentoxid felett 45—52 C°-on 1 Hgmm nyomáson 20 óráig szárítunk. 1,5 g 7-{ß-[o-N,N-bisz(natrium-szulfometil)-amino-metil-fenil]-propionamido}-3-(tetrazolo[4,5-b]piridazin-6--il-tio-metil)-cefem-3-4-karbonsav-nátriumsót kapunk, mely vízben jól oldódik ( >-1 g/ml). B) Formaimból és nátrium-biszulfitból kiinduló eljáírás a) 1 ml (10 mM) 30%-os formalin és 10 ml vízben oldott 1 g nátrium-biszulfit oldatához egymás után 2 mM 7-[ß-(o-amino-metil-fenil-propionamido]-3-(tetrazolo[4,5-b]piridazin-6-il-tio-metil)-cef-3-em-4-karbonsavat, 6 ml ÍM nátrium-etil-hexanoát-oldatot és 10 ml izopropanolt adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten 2,5 óráig keverjük és hozzáadjuk 300 ml etanolhoz. A képződött 7-{ß-[o-N,N-bisz(natrium-szulfometil)-5 -amino-metil-fenil]-propionamido}-3-(tetrazolo[4,5-b] piridazin-6-il-tio-metil)-cef-3-en-4-karbonsav-nátriumsót szűréssel tömörítjük, 3 X 50 ml etanolllal mossuk és vákuumban megszárítjuk. Kitermelés 1,5 g. b) 2 mM 7-[ß-(o-amino-metil-fenil-propionamido]-10 -3-(tetrazolo[4,5-b]piridazin-6-il-tio-metil)-cef-3-em-4--karbonsav, 6 ml ÍM etil-acetátos nátrium-2-etil-hexanoát, 10 ml izopropanol és 10 ml víz elegyéhez 1 ml (10 mM) 30%-os formaiint adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten 2 óráig keverve tiszta oldatot kapunk 15 kevés olajszerű kiválással. 1 g nátrium-biszulfit hozzáadása után az oldatot további 2 óráig keverjük; ezen idő alatt az olajos kiválás feloldódik az oldatban. Élénk keverés közben a reakcióelegyet hozzáadjuk 300 ml etanolhoz. 1,61 g7-{ß-[o-N,N-bisz(natrium-szulfometil-) 20 -amino-metil-fenil]-propionamido}-3-(tetrazolo[4,5-b] piridazin-6-il-tio-metil)-cef-3-em-4-karbonsav-nátriumsót kapunk, melyet szűréssel összegyűjtünk, 3 X 50 ml etanollal mosunk és vákuumban szárítunk. 25 In vitro és in vivo vizsgálatok A 7-[(o-amino-metil)-fenil-propionamido]-3-(tetrazolo[4,5-b]piridazin-6-il-tio-metil)-cef-3-em-4-karbonsav új, széles spektrumú, félszintetikus Ií^ képletű cefalospo-30 rin. Vizsgálataink szerint kitűnő in vitro és in vivo hatású számos Gram-pozitív és Gram-negatív baktériummal szemben, beleértve a cefalotinnal és cefaloridinnal szemben ellenálló baktériumokat. ICX képletű dimetánszul-35 fonát-adduktuma vízoldható, befecskendezésre és így a felszívódás és kiválasztás, heveny mérgező hatás és fájdalomérzékenység tanulmányozására alkalmas készítmény. Ennek az új cefalosporinnak először az in vitro bak-40 tériumellenes hatását vizsgáltuk kémcső-hígításos vagy agar-hígításos módszerrel; az így kapott, minimális gátlást előidéző koncentráció minden vagy csaknem minden vizsgált Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes és Diplococcus pneumoniae törzsnél kisebb 45 1 mcg/ml-nél és Salmonella enterítidis és Enterobacter cloacae különböző törzseinél kisebb 4 mcg/ml-nél, sőt gyakran 1,0 mcg/ml-nél. A 7-[(o-amino-metil-fenil)-acetamido]-3-(tetrazolo [4,5-b]piridazin-6-il-tio-metil)-cef-3-em-4-karbonsav új, 50 széles spektrumú, félszintetikus, IB2

képletű cefalosporin. Vizsgálataink szerint kitűnő in vitro és in vivo hatású számos Gram-pozitív és Gram-negatív baktériummal szemben, beleértve a cefalationnal és cefaloridinnel 55 szemben rezisztens baktériumokat. IC2

képletű dimetánszulfonát-adduktuma vízoldható, injektálásra alkalmas és így a felszívódás és kiválasztás heveny mérgező hatás és fájdalomérzékenység tanulmányozására alkalmas készítmény. 60 Először az in vitro baktériumellenes hatást vizsgáltuk kémcső-hígításos vagy agar-hígításos módszerrel; a minimális gátlást előidéző koncentráció kisebb 1,0 mcg/ml-nél minden vagy csaknem minden vizsgált Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Diplo-65 coccus pneumoniae törzsnél, különböző Bacillus-faj-16