166408. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a nigericin alkálsójának előállítására

MAGYAR SZABADALMI 166408 NÉPKÖZTÁRSASÁG LEÍRÁS JW SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY yiÄllikV iSP Bejelentés napja:. 1973. III. 15. (GO—1220) Nemzetközi osztályozás: C 12 d 9/14 /^HT Közzététel napja: 1974. VIII. 28. í, ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Megjelent: 1976. V. 31. .'I Feltalálók: Bittera Vilmos vegyésztechnikus 40% Dr. Gyimesi József oki. vegyész 10% Dr. Horváth István oki. vegyész 10% Ott István biológus 10% Stverteczky Györgyné dr. vegyészmérnök 10% Horváth Márta vegyésztechnikus 5% Kund Gusztáv vegyipari szakmunkás 5% Monostori László vegyészmérnök 5% Tölgyesi László vegyésztechnikus 5% Budapest, Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás a nigericin alkálisójának előállítására i A találmány tárgya eljárás mikrobiológiai úton nyert nigericin alkálisójának előállítására, ahol a mikrobiológiai úton kapott tenyészetet semleges vagy savas pH-n szűrjük, az így kapott micéliumot vizes lúgos metanollal extraháljuk, az extraktumot szűrjük, betöményít- 5 jük, majd' feldolgozzuk. A nigericint 1951-ben Harned és munkatársai írták le először. Termeléséhez Streptomyces violaceonigert használtak [Harned és munkatársai, Antibiotics and Chemotherapy 1, 594 (1951]. A nigericin Gram-pozitív 1.0 baktériumok ellen hatásos, állatgyógyászatban csirkekokcidiózis ellen használatos szer. A később a nigericinnel azonosított poliéterin-A-t Shoji és munkatársai izolálták 1968-ban. [J. Antibiot. 15 21, 402 1968); 70 09 235 sz. japán szabadalmi leírás; Chemical Abstracts 73, 43 924 (1970)]. Újabb eredmények szerint a nigericin, a poliéterin-A, és az X—464 antibiotikum azonos. Ezen közlemények szerint a tenyészetből elkülönített micéliumot metilalkohollal extra- 20 hálják, az extraktumot vákuumban betöményítik, majd a vizes sűrítményből a nigericint kloroformmal rázzák át szerves fázisba. Az antibiotikum tisztítását többszöri metanol-víz-kloroformos átrázással végzik, ami nagy térfogatok mozgatását és bepárlását igényli, így az 25 eljárás rendkívül körülményes és hosszadalmas. A szerzők nem adnak értékelhető adatokat a fermentlé feldolgozására vonatkozóan. Megemlítik azonban, hogy esetenként a feldolgozás során olajszerű termék keletkezik, melyet fáradságos és rendkívül veszteséges úton 30 kell tovább tisztítani oszlopkromatográfiai módszerekkel. A találmány célja olyan eljárás kidolgozása, mely lehetővé teszi a mikroorganizmus tenyészetéből kevés lépésben jó minőségű (legalább 950—1000 E/mg biológiai aktivitású) nigericin-alkálisó termék elkülönítését. A találmány alapja az a felismerés, hogy ha a mikroorganizmus hatóanyagtartalmú micéliumát lúgos metanollal extraháljuk, betöményítjük, és a sűrítményt vízzel hígítjuk, kiválik az oldatból a nigericin-Na nyerstermék. Ha a különben megfelelő minőségű nyerstermék helyett különleges tisztaságú nigericin-Na végtermék előállítása a cél, úgy egyszeri vizes metanolos átkristályosítással hófehér, minden követelményt kielégítő anyag nyerhető. A fenti felismerés előnye az, hogy az irodalomban leírt savas, illetve semleges közegben végzett micélium extrakció során a hatóanyaggal együtt igen sok zsírszerű szennyeződés extrahálódik, melytől csak többszöri átrázással és —• mivel a nigericin zsíroldékony — nagy veszteségek árán lehet a nigericint elkülöníteni. A találmány szerinti lúgos extrakciós eljárásnál ezzel szemben az extraktum bepárlását követő vizes hígításnál kiválik a nigericin-alkálisó, a folyamat során elszappanosodott zsírszerű szennyeződések pedig az anyalúgban maradnak vissza, és már az első nyerstermék olyan kifogástalan minőségű, hogy az esetek többségében nem igényel további átkristályosítást. A találmány tárgya eljárás mikrobiológiai úton nyert nigericin alkálisójának előállítására, ahol a mikrobioló-166408 1