166397. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új A-287 jelű antibiotikum előállítására
166397 Tenyészet jellemzők különböző agar táptalajokon (Inkubációs hőmérséklet: 30 C°) 10 Táptalaj Veget. micélium mennyisége A levegőbe nyúló részek morfológiája vagy spóraképződése Szín ellenfényben M P kódszám* 1CNB elnevezés** Glükóz-aszparagin-agar 4+ Sporangiumok; levegőbe nyúló micéliumok nem 10C7 észlelhetők Mérsékelt sárgás rózsaEmerson-agar 4+ Sporangiumok nincsenek; légmicéliumok nem szín 11B12 észlelhetők Erős narancsszín Bennett-agar 3+ Sporangiumok; légmicéliumok nem észlelhetők 12C7 Világosbarna Paradicsompépzabliszt-agar 1+ Sporangiumok nincsenek; légmicéliumok nem észlelhetők Nincs színmegjelölés Czapek-agar 3—4+ Sporangiumok; légmicéliumok nem észlelhetők 13D7 Világosbarna Agar-táptalaj 2+ Sporangiumok nincsenek; légmicéliumok nem 11B2 észlelhetők Halványsárga Tirozinos agar 2+ Sporangiumok nincsenek; légmicéliumok nem 13B7 észlelhetők Halványbarna Zabliszt-agar 3+ Sporangiumok; kismérvű „kivirágzás" („bloom") 12C3 Szükés sárga Glicerin-glicerin-agar 4+ Sporangiumok nincsenek; kismérvű „kivirágzás" 12B9 Barnás narancsszín Élesztőkivonat-agar 4+ Sporangiumok; kismérvű „kivirágzás" 12B9 Barnás narancsszín Szervetlen sók-keményítő-Nagyon sok sporangium; kismérvű „kivirágzás" 12A9 agar 3-4+ Mérsékelt narancsszín Glicerin-aszparagin-agar 4+ Nagyon sok sporangium; kismérvű „kivirágzás" 9C8 Mérsékelt narancsszín Kalcium-malátos-agar 4+ Sporangiumok nincsenek; kismérvű „kivirágzás" 9C8 Mérsékelt narancsszín Élesztőkivonatos-malátakivonatos-agar Sporangiumok; kismérvű „kivirágzás" * Az A. Maerz és M. Rea Paul: „A Dictionary of Color" (Színszótár, McGraw-Hill,New York, N. Y. c.) munkájában megadott színtömbökre vonatkozik. ** „The ISCC—NBS Method of Designating Colors and a Dictionaryr of Color Names", National Bureau of Standards Circular 553, U. S. Government Printing Office szerint talaj bármelyikét alkalmazhatjuk ugyan, a termelés gazdaságossága, a legnagyobb hozam és az antibiotikumok elkülönítésének könnyűsége szempontjából azonban bizonyos táptalajok előnyösebbeknek bizonyulnak. 45 így például szénhidrát forrásként legelőnyösebb a melasz, nitrogén forrásként pedig a szöjaliszt. A táptalajnak tápláló szervetlen sókat is kell tartalmaznia. Ezek közül alkalmazhatjuk a mikroorganizmus számára nátriumot, káliumot, ammóniumot, kai- 50 ciumot, foszfátot, kloridot, szulfátot, acetátot vagy karbonátot rendelkezésre bocsájtó illetve ilyenek rendelkezésre bocsájtására képes szokásos sókat. A táptalaj ezeken kívül előnyös és kedvező eredménnyel tartalmazhat olyan növekedési faktor forrásokat, mint a 55 lepárlási oldható maradékok és az élesztőkivonatok. Ahogyan az más mikroorganizmusok növekedéséhez és fejlődéséhez is szükséges, a találmány szerinti eljárásban alkalmazott Actinoplanes törzs tenyésztésére alkalmas táptalajnak a növekedéshez fontos nyomelemeket 60 is tartalmaznia kell. Az ilyen nyomelemeket rendesen a táptalaj egyéb alkotórészeinek hozzáadása során szenynyezésként visszük be a tápkeverékbe. A táptalaj kezdeti pH-ja változtatható illetve változó lehet. Mégis kívánatos, hogy azt az organizmus leoltá- 65 sa előtt, az alkalmazott táptalaj jellégétől függően, 6,8 és 7,5 közötti értékre állítsuk be. A pH végső értékét, legalábbis részben, a táptalaj kezdeti pH-ja, a táptalajban jelenlevő kiegyenlítők (pufferek) és az az idő határozza meg, amely alatt az organizmust növekedni engedjük. Az A—287 antibiotikumok nagy mennyiségeinek előállításához előnyösen süllyesztett aerob tenyészetekben, fermentor tartályokban fermentálunk. Az antibiotikumokat kis mennyiségekben rázott tenyészetekben (rázópalackokban) is előállíthatjuk. Figyelemmel arra az időigényre, késésre, amely az antibiotikum gyártásban rendesen felmerül akkor, ha nagy tartályokban az organizmus spóráival végezzük a leoltást, az oltáshoz előnyösen vegetatív inokulumot használunk. A vegetatív inokulumot oly módon állítjuk elő, hogy kis táptalaj térfogatra az organizmus spóráit vagy micélium fragmentumait oltjuk le és így az organizmus friss, aktívan növekedő tenyészetét állítjuk elő. Az így kapott vegetatív inokulumot ezután nagyobb tartályokba viszszük át. A vegetatív inokulum tenyésztésére alkalmazott táptalaj megegyezhet a nagyobb fermentációkban alkalmazottal, azonban ettől eltérő táptalajokat is használhatunk. 5
