166397. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új A-287 jelű antibiotikum előállítására

7 166397 8 leges gombafonal az agárban mélyebben bőségesen található vízszintes szubsztrátum gombafonalaiból származik és az agar felszínén sporangiumképződésben fejeződik be. Sporangiumok Czapek-agar táptalajon (Difco Laboratories, Detroit, Michigan) sporangiumok, spóra tokok bőségesen képződnek. A sporangiumok 22—25 C°-on végrehajtott mintegy hétnapos inkubáció után jelennek meg. A telep öregedésével a telep egész felületét sűrű sporangiális bevonat fedi. A sporangiumokat egyedülállóan igen rövid sporangiumhordozók (a függőleges gombafonalaknak az agarfelszín fölé nyúló végrészei) hordozzák. Elvétve egy-egy sporangiumhordozo elágazik és rajta második vagy ritkán harmadik sporangium fejlődik. A sporangiumok tipikusan gömb alakúak vagy közel gömb alakúak és nagyságuk elérheti a 8—10[i,m-t. A sporangiumok kb. 35—50 közel gömb alakú spórát tartalmaznak, amelyek egy vagy több kötegben rendeződnek el a sporangiumban. Kifejlett, érett állapotban a sporangium spórák közelítőleg 1,0 m átmérőjűek. A sporangium felrepedésénél a sporangium fal csaknem teljes felbomlása következik be. A sporangiumokat vízbe helyezve, a spórák felszabadulása rendszerint 10—15 perc múltán megkezdődik. A spórák rendszerint nem képesek azonnal mozgásra, poláris csillóköteg segítségével azonban mintegy 5 percen belül aktívan mozgékonyakkiválnak. Megjelenés a táptalajon Czapek-agar táptalajon: Jó növekedés; egy ponton végrehajtott leoltásnál 4 hét alatt kb. 1 cm átmérőjű telep fejlődik. Levegőbe nyúló gombafonalak nem észlelhetők. A telep rendszerint lapos, a középen enyhe domborulattal. A telep először világos narancsszínű. A szín sötét narancsszínűre változik akkor, amikor sporangiumok képződnek és ezek bevonják a micéliumokat. Peptonos-Czapek-agar táptalajon: Elég jó növekedés; egy ponton végrehajtott leoltásnál 4 hét alatt kb. 0,5 cm átmérőjű telep fejlődik. Levegőben nyúló gombafonalak nem észlelhetők. A telep általában lapos, diffúz és enyhén nyálkás. A telep fakó barnás narancsszínű, sporangiumok nem képződnek. Anio-Hennsen-agar-táptalajon: Elég jó növekedés; egy ponton végrehajtott leoltásnál 4 hét alatt kb 0,5 cm átmérőjű telep fejlődik. Levegőbe nyúló gombafonalak nem észlelhetők. A telep „hegyszerű", éles csúccsal a közepén és a telep széle felé nyúló éles vonulatokkal. A telep színe a világos narancsszínűtől a sárg᧠narancsszínűig terjed, A telep idő* sebb részében nagy számban keletkeznek sporangiumok, de a sporangiumképződés nem éri el a Czapek-agar táptalajon észlelt mértéket. 5 A sejtfal kémiai összetétele Az Actinoplanes utahensis NRRL 5614 sejtfal kémiája igen hasonló az Actinoplanes utahensis törzsekéihez. 10 (Szaniszlo és Gooder, 1967). Az 1 ml 6N sósav oldattal 100 C°-on 18 óra alatt végrehajtott hidrolízis után megmaradt sejtfalmáradványok automatikus aminosav és aminocukor elemzése kimutatta, hogy glükózamin, muraminsav, glicin, alanin és 2,6-diamino-3-hídroxipi-15 melinsav (HDAP) nagy koncentrációkban vannak jelen a sejtfalakban. 2,6-diamino-pimelinsavat (DAP) kisebb koncentrációban mutattunk ki. A II. táblázatban az Actinoplanes utahensis NRRL 20 5614 és az A. utahensis (Szaniszlo és Gooder) összehasonlító sejtfal aminosav mólarányait mutatjuk be (egységnek a glutaminsavat tekintve). II. táblázat 25 Aminosavak Organizmus Gluta. mimav Glicin Alanin HDAP DAP 30 Actinoplanes utahensis NRRL 5614 1,00 1,14 0,74 0,61 0,15 Actinoplanes utahensis 35 (Szaniszlo és Gooder) 1,00 1,18 0,93 0,53 0,11 A 2 ml 2 N oldattal 100 C°-on végrehajtott 2 órás hidrolízis után a maradékok papírkromatográfiás elem-40 zése alapján megállapítottuk, hogy a sejtfalak Kimutatható mennyiségekben tartalmaznak glükóz, galaktóz, mannóz, arabinóz, xilóz és ramnóz monoszacharidokat. Ezek a cukrok általában megtalálhatók az Actinoplanes utahensis törzsek sejtfalaiban. 45 Az A—287 termelő törzs megelőző rendszertani leírása alapján az organizmust az Actinoplanes utahensis Couch egy új törzseként azonosítottuk és osztályoztuk. Az A—287 termelő organizmus kismértékben eltér a Couch által a J. Elisha Mitchell Sei. Soc. 79, 53—66 50 (1963)-ban közreadott munkában leírt Actinoplanes utahensis Couchtól. Czapek-agar táptalajon az új törzs bőségesen termel sporangiumot, színe pedig a világos narancstól a fakó barnás narancsig terjed, míg az említett közleményben leírt organizmus „nem vagy csak igen 55 kevés" sporangiumot termel, színe pedig ragyogó sárgabaracknarancs. Ez a színkülönbség peptonos-Czapekagar táptalajon is, ahol az új törzs esetében világosbarna színt találtunk az idézett irodalomban leírt narancsszínnel szemben. Ezek az eltérések azonban csupán 60 törzsbeli különbségek; a jellemző tulajdonságok minden egyéb tekintetben összhangban vannak e faj irodalomban közölt leírásával. Amint azt már említettük, az Actinoplanes utahensis NRRL 5614 az A—287 antibiotikumok előállítása cél-65 jából táptalajon tenyészthető, Táptalajként számos táp» 4