166159. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szabad, vagy N-szubsztituált 7-amino-CEF-3-EM-4-karbonsav-vegyületek előállítására
166159 13 14 nyei szerint a 3. példa szerinti eljárással előállított termékkel azonos. A termék antibakteriális hatása (a legalacsonyabb növekedésgátló koncentráció) Bacillus subtilis-szel szemben mérve: 1,25 ^g/ml. 13. példa 2000 ml, cefalosporin C-t tartalmazó fermentlevet anioncserólő gyantával [például Amberlite IRC—50 (H+ ), Rohm és Haas, USA] töltött oszlopra csepegtetünk, majd az eluátumhoz 35 g 1-izoborniloxikarbonil-4-aminopiridiniumkloridot adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 1,5 órán át keverjük, miközben pH-ját 8,0 és 8,5 között tartjuk. Az elegy pH-ját ezután 2 n sósav oldattal 2-re állítjuk be, majd etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos fázist vízzel mossuk, majd 0,2 mólos, 8,0-as pH-jú foszfátpufferral extraháljuk. A vizes fázis pH-ját ismét 2-re állítjuk be, majd etilacetáttal ismét extraháljuk. Az etilacetátos fázist nátriumklorid telített vizes oldatával mossuk, vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk, majd az etilacetátot ledesztilláljuk. A desztillációs maradókhoz petrolétert adunk, amikor 6,9 g nyers N-izoborniloxikarbonilcefalosporin C-t kapunk. A Bacillus subtilis tesztorganizmussal szemben mért biológiai értékmérés adatai szerint a termék tisztasága 54%-os. 14. példa 700 ml vízmentes metilénklorid és 6,4 ml vízmentes piridin elegyéhez 10,2 g N-izoborniloxikarbonilcefalosporin C-t, majd 12,3 ml trimetilklórszilánt adunk. A reakcióelegyet 1 órán át, szobahőmérsékleten keverjük. A reakció befejeződése után —20 °C hőmérsékletre hűtjük az elegyet és 21,7 ml piridint, majd 14,2 g, 500 ml vízmentes metilénkloridban oldott foszforpentakloridot adunk hozzá. Az így kapott reakcióelegyet —12 °C hőmérsékletre hűtjük, és 45 percen át keverjük. Ezt követően —10 °C hőmérsékleten 250 ml vízmentes metanolt adunk az elegyhez, és ugyanezen a hőmérsékleten 30 percen át, majd 25 °C hőmérsékleten további 30 percen át keverjük. 40 ml 25 s%-os hangyasavat adunk a reakcióelegyliez, majd trietilaminnal a pH-ját 2,0-re állítjuk be. A 2,0-es pH-jú elegyet 45 percen át keverjük. Ezt követően trietilaminnal az elegy pH-ját 3,5-re állítjuk be, ezután állás közben csapadék válik ki. A csapadékot szűréssel elkülönítjük, metilénkloriddal, metanollal, majd éterrel mossuk, szárítjuk, amikor 3,6 g (kitermelés: 77,3%) 7-aminocefalosporánsavat kapunk. 15. példa Cefalosporin C-t állítunk elő a következőképpen: Cephalosporium sp. ATCC 14553 törzset tenyésztünk 7 napon át, burgonya-dextróz-agar (Difco) lemezeken. Ez idő alatt á mikroorganizmus megfelelően kinő. 500 ml, 1,5% húsextraktumot, 0,5% kukoricalekvárt, 3% szacharózt és 0,15% CaC03 -t tartalmazó, pH 6,8 értékű táptalajt töltünk egy 2 literes Sakaguchi lombikba, sterilizáljuk, majd a lombikot a lemezes tenyészetről lemosott spórákkal oltjuk be. A beoltott lombikot 26 °C-on 3 napon át rázatva inkubáljuk. 50 literes rozsdamentes acél fermentort 25 liter, 2,0% nyers szójalisztet, 3,0% szacharózt, 0,4% 5 DL-metionint és 0,15% CaC03 -t tartalmazó táptalajjal töltünk meg, nagy nyomáson sterilizáljuk majd lehűtjük. A fermentort aszeptikusán beoltjuk a fentiek szerint tenyésztett inokulummal, és a beoltott táptalajt 26 °C hőmérsékleten 0,8 tf levegő/ 10 táptalajtérfogat levegőztetés mellett 200 rpm fordulatszámmal kevertetjük. 96 órás inkubálás után a fermentlevet 5,5 pH-értékre történő állítás után leszűrjük, és a szűrt fermentlé 500 y/ml cefalosporin C-t tartalmaz. 15 A szűrt fermentlevet (20 liter) háromszor 1/3 térfogatnyi etilacetáttal extraháljuk, a zsíroldható szennyezések eltávolítására, és a vizes fázis pH-ját vizes nátriumhidroxidoldattal pH = 8,5 értékre állítjuk. Keverés közben a vizes fázishoz 10 g izo-20 borniloxikarbonil-kloridot adunk, és a reakcióelegy pH-ját nátriumhidroxidoldattal 8,5 értéken tartva a reakciót 2 órán át folytatjuk szobahőmérsékleten. Ezután a reakcióelegy pH-ját pH 2 értékre savanyítjuk sósavval, és háromszor 5 liter etilacetáttal 25 extraháljuk. A kapott etilacetátos extraktumot 0,2 mólos foszfátpufferrel (pH 8) extraháljuk, a vizes fázis pH-ját 3-ra állítjuk be, és az izoborniloxikarbonil-cefalosporin C-t ismét etilacetátba rázzuk át. 30 A kapott etilacetátos oldatot vízzel mossuk, szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrált oldathoz petrolétert adva 18,9 g nyers izoborniloxikarbonil-cefalosporin C-t kapunk. 35 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás 7-amino-cef-3-em-4-karbonsav, vagy e vegyület 7-helyzetben 5-(izoborniloxikarbonil-amino)-adipoilcsoporttal acilezett aminocsoportot tar-40 talmazó acilszarmazékának előállítására, illetve 7-(5-amino-adipoil)-amino-cef-3-em-4-karbonsav kinyerésére 7-(5-amino-adipoil)-amino - cef - 3 - em - 4--karbonsav tartalmú vizes oldatból, előnyösen szenynyezett vizes oldatból, azzal jellemezve, hogy az ol-45 datban jelenlévő 7-(5-amino-adipoil)-amino-cef-3-em 4—karbonsavat 1-izoborniloxikarbonil-piridiniumkloriddal reagáltatunk, kívánt esetben a keletkezett N-izoborniloxikarbonil-7-(5-amino - adipoil) - amino-cef-3-em-4-karbonsavat elválasztjuk a reakció-50 elegytől és savval kezeljük, vagy kívánt esetben a 7-amino-cef-3-em-4-karbonsav előállítására a keletkezett N-izoborniloxikarbonil 7-(5-amino-adipoil)-amino-cef-3-em-4-karbonsavat észterezzük, előnyösen mindkét karboxilcsoportján benzhidrollal, a ka-55 pott N-izoborniloxi-karbonil 7-(5-amino-adipoil)amino-cef-3-em-4-karbonsav észtert dezacilezzük és észterhasításnak vetjük alá. (Elsőbbsége: 1971. augusztus 17.) 3. Eljárás 7-amino-cef-3-em-4-karbonsav, vagy e 60 vegyület 7-helyzetben 5-(izoborniloxikarbonil-amino)-adipoil-csoporttal acilezett aminocsoportot tartalmazó acilszarmazékának előállítására, illetve 7-(5-amino-adipoil)-amino - cef- 3 - em - 4 - karbonsav kinyerésére 7-(5-aminó-adipoil)-amino-cef-3-em-4-65 -karbonsav tartalmú oldatból, előnyösen szennye-7
