165957. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(D-5-amino-5-karboxivaleramido)-3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsav előállítására fermentációval
15 165957 16 gálati módszerrel határozzuk meg. Vizsgálati mikroorganizmusként Vibrio percolans-t (ATCC 8461) használunk. A szűrőpapír korongokat a hígított fermentlébe merítjük és agar-tartalmú Petri-csészék felületére helyezzük, amelyeket előzőleg beoltunk a vizsgálati mikroorganizmussal, a Vibrio percolans-szal (ATCC 8461). Ugyancsak Petri-csészékre helyezünk olyan korongokat, melyeket előzőleg ismert koncentrációjú antibiotikumot tartalmazó szabványos oldatba merítettünk. A korongokat éjszakán át 28 C° hőmérsékleten inkubáljuk, majd feljegyezzük a gátlási zónák átmérőjét. Az antibiotikum koncentrációját a fermentleben ismert koncentrációjú szabványos antibiotikum oldatok zónaátmérőjére vonatkozó szabványos görbe interpolálásával számítjuk. Ezzel az eljárással kiszámítva a Streptomyces clavuligerus NRRL 3583 átlagban véve 749 /ug/ml 7 -(D - 5 -amino-5-karboxivaleramido)-3-(karbarnoiloximetil)-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsavat termel az alap termelőközegben. D-lépés: Nátriumtioszulfát adagolása Nátriumtloszulfát adagolása az I. közeghez a C-lépésben jelentősen növeli a 7-(D-5-amino-5-karboxivalerantído)-3-(karbamoÜoximetil)-7-metoxi-3-cefém-4-karbonsav hozamot. Az I. táblázatban bemutatjuk e hozamnövekedés mértékét különböző koncentrációk függvényében. A kontroll vizsgálatokat az előbbiekben leírt A-C-lépésnek megfelelően végezzük a többi kísérlettel együtt, mégis azzal az eltéréssel, hogy a nátriumtloszulfát jelzett mennyiségeit 0-48 óra között változtatott idő elteltével adagoljuk. „Nulla" órán azt értjük, hogy a nátriumtioszulfátot a B-lépésből való oltóanyaggal véghezvitt oltással egyidőben adagoljuk. A vizsgálatokat a C-lépésben leírtakkal azonos módon végezzük. 10 15 20 58 « tfc el 3 "o CO „ o jö 8Pl .2 %4> lo "3 '& s s § *§ -O N 1 S ü & 3 Ä .2 PS *s < s 4 1 kontroll 0 658 2 0 0,10 945 3 0 0,20 1154 4 0 0,40 1150 5 0 0,60 1162 5 1 kontroll 0 891 2 0 0,10 1211 3 0 0,20 1291 4 0 0,40 1133 6 1 kontroll 0 766 2 0 0,20 995 Az I. táblázatban látható eredmények igazolják, hogy 6 kísérletben a nátriumtioszulfát adagolás az 25 antibiotikum termelést átlagban 40%-kal serkentette. Sem a tioszulfát beadagolásának időpontja, sem koncentrációja nem bizonyul kritikusnak. 30 7. Példa Nátriumtioszulfát és/vagy L-a-aminoadipinsav adagolása 35 40 I. táblázat E kísérletben megismételjük a 6. példában leírt eljárást azzal az eltéréssel, hogy egyedül L-a-aminoadipinsavnak, valamint nátriumtloszulfát és L-a-aminoadipinsav kombinációjának következő koncentrációit adagoljuk az előző példában idézett nátriumtioszulfát-koncentrációk helyett. Az adagolást a 6. példa C-lépésének megfelelően az oltóanyagba az inkubálás előtt visszük be. "§ J Adagolás idő-3 1 pontja, óra 1 kontroll 2 0 3 24 1 2 3 4 S 6 1 2 3 4 kontroll 0 0 0 40 48 kontfelí 0 0 0 0 0,10 0,10 0 0,10 0,20 0,40 0,10 0,10 0 0,10 0,20 0,40 721 865 828 755 991 1163 856 1120 1095 748 936 845 1023 45 50 51 60 II. táblázat Nátriumtioszulfát és L-a-aminoadipinsav együttes adagja, % Antibiotikum termelés Mg/ml 1 0 (kontroll) 766 2 0,025% L-a-aminoadipinsav 833 3 0,050% L-a-aminoadipinsav 880 4 0,20% nátriumtioszulfát 995 5 0,20% nátriumtloszulfát 1051 +0,025% L-a-aminoadipinsav 6 Q.2Q% nátriumtloszulfát 1195 +0.05% L-a-aminoadipinsav A táblázatban látható eredmények azt igazolják, hogy nátriumtioszulfát és L-a-amineadipin-MV együttes adagolása nagyobb mértékben serkinti a 7-(D-5-amin0-5"karboxivilirimido)>3-(karba«3 moilöxlm§tÜ)'7-inetoxi«3-eifém"4'k«, bonsav ter-8
