165926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nigericin-tartalmú fermentlé előállítására mikrobiológiai úton
3 165926 4 szójaliszt vagy mogyoróliszt koncentrációját az optimálisnak talált 1,0%-ról 1,5, 2,0, illetve 3,0%-ra növeljük, az elérhető maximális nigericinkoncentráció kétharmadára, felére, illetve közel nullára csökken. Ugyancsak ez tapasztalható más 5 nitrogénforrás alkalmazásakor is (pl. mogyoróliszt, élesztőkivonat, különböző módon előkezelt gyapotmagliszt, kazeinhidrolizátum, kukoricalekvár). A találmány további alapja az a felismerés, hogy a földmintából izolált Streptomyces albus 10 törzs nigericin-termelésének vasion-érzékenysége Co2+ -ionokkal megszüntethető. Saválló acélfermentorban sterilezett csapvíz vasion-tartalma 15—20 gamma/ml. Ennél a koncentrációnál a nigericin-termelés alacsony, és a leállási ered- 15 menyek erősen szórnak. Kobaltsó adagolásával a termelés lényegesen emelkedik és az eredmények reprodukálhatóvá válnak. A fenti elismerések azért meglepők, mert egyrészt az irodalmi adatokkal [Berger és mun- 20 katársai: J. Am. Chem. Soc. 73, 5295 (1951), Níshimura és Otsuka: 70/09 235 számú japán szabadalmi leírás] és a fermentációs iparban általánosan bevált gyakorlattal ellentétes, hogy a nigericin termelése alacsony nitrogén-tartalmú táp- 25 talajon lényegesen kedvezőbb, mint magas nitrogén-koncentrációjú táptalajon, másrészt az üzemi méretekben végzett fermentációknál elkerülhetetlen vasion- tehát fémion-érzékenységet egy másik fémion — előnyösen Co2+ -ion — adagolásával szün- 30 tétjük meg. Az eljárásunkban felhasznált Streptomyces albus, törzs morfológiai és fiziológiai jellemzőit S. Á. Waksman ismerteti részletesen [The Actinomycetes, Vol. II. 172. old. (Williams and Wilkins 35 Comp., Baltimore, 1961)]. A találmány tárgya eljárás nigericin-tartalmú fermentlé előállítására mikrobiológiai úton, ahol a fermentációt előfermentáció közbeiktatása után, komplex fehérjét, szerves szénforrást és szervetlen 40 sókat tartalmazó táptalajon Streptomyces albus (M. N. G.-105) törzzsel aerob fermentációs körülmények között végezzük. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy a fermentációt 0,8-1,4%, előnyösen 1,0-1,2% komplex fehérjét és 45 1—6 gamma/ml, előnyösen 3,0-3,5 gamma/ml Co2+ -iont tartalmazó táptalajon végezzük. Komplex fehérjeként szójalisztet vagy mogyorólisztet, szerves szénforrásként glükózt vagy glicerint használunk. A tenyésztő táptalajt fen- 50 tieken kívül szervetlen sókkal, előnyösen NaCl-dal, CaC03 -tal és KH 2 P0 4 -tal egészítjük ki. A törzs fenntartását előnyösen burgonyakivonat-glükóz agáron végezzük. A fermentációs táptalaj pH-ját sterilezés előtt 7,0-7,2-re célszerű beállítani. A sterilezést 120-122 C°-on, 40 percen át előnyös végezni. A steril táptalajt az ismert módon, a Streptomyces albus törzs spóraszuszpenziójával vagy vegetatív tenyészetével oltjuk. A főfermentáció indításakor az inokulum mennyisége 3-10%, előnyösen 5%. A főfermentációs hőmérsékletet célszerű 26 C° és 32 C° között tartani, az optimális hőmérséklet 28 C°. A táptalaj keverését és levegőztetését úgy célszerű beállítani, hogy a szulfitoxidációs érték 1,0—2,0 mM|02/l/perc legyen. Habgátlókánt pálmaolajat vagy polipropilénglikolt használunk. A találmány szerinti eljárás előnye, hogy igen egyszerű eszközökkel, könnyen beszerezhető és olcsó anyagokkal igen magas, 3000 gamma/ml feletti koncentrációban teszi lehetővé a nigericin előállítását. Az eljárás további előnye, hogy az üzemi méretű fermentációknál egyszerű módon teszi lehetővé a termelő organizmus vasion-érzékenységének megszüntetését. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: 1. példa A Streptomyces albus törzs burgonyakivonatglükóz agárról nyert spóraszuszpenziójával 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban 100—100 ml táptalajt oltunk, melynek összetétele a következő: szójaliszt 1,0% glicerin 2,0% CaC03 0,5% NaCl 0,3% KH2 P0 4 0,1% A tenyészetet 28 C° hőmérsékleten, 48 órán át síkrázógépen rázatjuk. A növekedés és a sterilitás ellenőrzése után 5 liter hasznos térfogatú laboratóriumi üvegfermentorokat oltunk vele. Az 1. táblázatban a különböző nitrogénforrások és szervetlen sókoncentrációk mellett kapott nigericin-koncentrációkat tüntettük fel. 1. táblázat Kísérlet Szerves nitrogénforCo++ -kon-Nigericinsorszáma rás-koncentrációja centráció koncentráció % gamma/ml gamma/ml 1. 1,0 2110 2. 1,5 1620 3. 2,0 890 4. 3,0 50 1,0 3,2 3570
