165752. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a B-5050 és a tetrahidro-B-5050 antibiotikum észtereinek előállítására
15 165752 16 HL példa A II. példa szerinti módon a fő fermentáció során kapott 4000 liter szűrt fermentlé pH-ját 8,0-ra állítjuk be, és a fermentlevet harmadrész 5 térfogatú etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos extraktumot mintegy 100 literre töményítjük be. A betöményített oldatot 50 liter vízzel mossuk, majd 3x50 liter 1/3 mólos vizes KH2P0 4 oldattal extraháljuk, amelynek pH-ját előzőleg 10 foszforsawal 3,0-ra állítottuk be. A vizes extraktumokat egyesítjük, a pH-t 8n vizes ammóniaoldattal 9 és 10 közé állítjuk be, és 75 liter etilacetáttal extrahálunk. Az etilacetátos extraktumot 3 x 25 liter vízzel mossuk, azután mintegy 15 1,5 literre töményítjük be. Mintegy 30 liter n-hexánt adunk a betöményített oldathoz, mire abból 522 g nyers porszerű termék válik ki. A nyers terméket benzolból átkristályosítva 272 g kristályos B—5050 antibiotikumkeveréket kapunk, 20 Ha az előbbi eljárásban a KH2PO4 oldat helyett 0,2 n vizes ecetsavoldatot használunk, 720 g kristályos B—5050 antibiotikumkeveréket kapunk. A kapott B-5050 antibiotikumkeverék 19g-ját 25 75 ml acetonban oldjuk. Az oldatot 800 g szilikagéllel (Merck A. G. gyártmány) töltött oszlopon kromatografáljuk. Eluálószerként 3000 ml 1 :1 arányú etilacetát-benzol elegyet használunk, és ekkor 7,25 g, túlnyomórészt B-5050-A és -B 30 antibiotikumot tartalmazó kristályos anyagot kapunk. Az eluciót ezután 2 :1 etilacetát-benzol eleggyel folytatjuk. Az első 1100 ml-es frakciót feldolgozva 2,22 g kristályos anyagot kapunk, amely túlnyomórészt B-5050-B és -C anti- 35 biotikumból áll. A következő 200 ml-es frakcióból 0,90 g, főleg B-5050-C antibiotikumot tartalmazó kristályos terméket kapunk. A következő 300 ml-es frakció feldolgozásával 1,4 g kristályos terméket kapunk, amely főleg B-5050-C és -D 40 antibiotikumot tartalmaz. Az utolsó 600 ml-es frakció 1,99 g terméket ad, amelynek kristályai túlnyomórészt B—5050-D és -E antibiotikumból állnak. A kolonnát ezután 600 ml 3:1 arányú etilacetát-benzol eleggyel eluáljuk, amikor is 45 0,645 g kristályos terméket kapunk, mély főleg B-5050-D és -E antibiotikumból áll. Az utolsó frakcióból, amelyet 1600 ml etilacetáttal eluálunk, 2,09 g kristályos terméket kapunk, amely főleg B-5050-F antibiotikumot tartalmaz. 50 A fentiek szerint kinyert B-5050-A és -B antibiotikumot tartalmazó kristályos termék 7,25 g-ját 40 ml acetonban oldjuk és 400 g szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk, az 55 eluciót 1 :1 arányú etilacetát-benzol eleggyel végezzük. 1,5 g kristályos B-5050-A és 0,65 g kristályos B-5050-B antibiotikumot kapunk. Az előbbiek szerint kinyert B-5050-B és -C €0 kristálykeverék 2,22 g-ját 20 ml acetonban oldjuk és 300 g szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Eluálószerként 3 :1 arányú benzol-aceton elegyet használunk. 0,398 g kristályos B-5050-B antibiotikumot kapunk. Az eluciót 2 :1 arányú 65 benzol-aceton eleggyel folytatjuk, amikor is 0,269 g kristályos B-5050^C antibiotikumot kapunk. A főként B-5050-C antibiotikumot tartalmazó 0,90 g kristályos anyagot 5 ml acetonban oldjuk és 100 g szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Az eluciót 2 :1 arányú etilacetát-benzol eleggyel végezzük, és ekkor 0,258 g kristályos B—5050—C antibiotikumot kapunk. Az 1,40 g sűrű kristályos terméket, amely nagyrészt B-5050-C és -D antibiotikumból áll, 10 ml acetonban oldjuk és 150g szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Eluálószerként 2:1 arányú benzol-aceton elegyet használunk. 0,596 g B-5050-C és 0,187 g. kristályos B—5050-D antibiotikumot kapunk. Az 1,99 g súlyú és túlnyomórészt B-5050-D és -E antibiotikumból álló kristályos anyagot 30 ml acetonban oldjuk és 300 g szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Eluálószerként 2:1 arányú benzol-aceton elegyet használunk. 0,304 g kristályos B-5050-D és 0,187 g kristályos B-5050-E antibiotikumot kapunk. A 2,09 g súlyú kristályos terméket, mely főleg B-5050-F antibiotikumból áll, 15 ml acetonnal oldjuk és 250 g szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Az eluciót 3:1 arányú etilacetát-benzol eleggyel végezzük. 0,585 g kristályos B—5050—F antibiotikumot kapunk. IV. példa Tetrahidro-B-5050 antibiotikum előállítása 400 ml etanolban feloldunk 40 g kristályos B-5050 antibiotikumot, és 12 g 10%-os palládiumos csontszenet adunk az oldathoz. (A katalizátor Engelhard gyártmány.) A katalitikus redukciót 7 órán át folytatjuk, miközben 2 mól hidrogén abszorbeálódik. A reakcióelegyből kiszűrjük a katalizátort, ezután az elegyet csökkentett nyomáson betöményítjük. A desztilláció maradékhoz n-hexánt adunk, mire porszerű csapadék válik ki. Hozam 36,6g. A termék elemi összetétele: C4 iH 7 iNOi 6 , e képletre számított: C = 59,05%, H = 8,58%, N = 1,68%, talált: C = 58,88%, H = 8,72%, N = 1,60%. [a]h3 -57,0° (c = 1,0 kloroform) V. példa Tetrahidro-B-5050-a-észter előállítása 900 mg a-propionil-B-5050 antibiotikumot, amelynek előállítását az 1. példában ismertetjük, 40 ml etanolban oldunk, és az oldathoz 300 mg 8
