165526. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-4696-jelű új antibiotikum előállítására

165526 9 10 shington állambeli Cascade hegyvidéken gyűjtött földmintából izoláltuk. Az organizmus Dr. Jdhn N: Couch törzsgyűjteményében i(Északkarolinai Egyetem) az 681-es számot kapta. Az ATOC 23 342 jelű Actinoplanes fajta a következőkben fiziológiai és tenyészett tulajdonságaival jellemezzük. A színeket Ridgeway, Color Standards and Nomenclature (1912) című munkájának színskálája szerint adjuk meg. Az Actinoplanes ATCC 23 342 faj mikroszkopikus morfológiája és általános tenyésztési tulajdonságai Mikroszkopikus morfológia: A micéliumok a Liquidamber {illatos gumifa) vizes virágporán gyéren jelennek meg. A hifák elágazók, rajtuk szeptumok figyelhetők meg, átmérőjük 0,2—1,5 pi. A hifák kitöltik a pollenszemeket, vizes szuszpenzióban kb. a pollenszem átmérőjének megfelelő hosszúságban kinyúlnak abból. A sporangiophorok a vízcsepp felülete fölé nyúlnak; a spóratartó nyelek néha elágazók, ekkor két, ritkábban több sporangium található ugyanazon sporangiophoron. A spóratartó nyelek 1,0—1,5 /j, hosszúak, vastagok és szeptumok figyelhetők meg rajtuk. A sporangiumok kicsik, átmérőjük 4—11 ju, alakjuk szubglübuláris, ritkábban globuláris, faluk rendszerint szabálytalan. Az érett spórák egy vagy több szabálytalan spirálban rendeződnek el a sporangiumban. A spórák között található töltőanyag miatt a sporangium megnagyobbodik, sima felületű gömb alakot vesz fel. A spórák könnyen mozgók, átmérőjük 1,0—1,5 ju, alakjuk globuláris vagy szubglobuláris. Tenyésztési tulajdonságok: Czapek-agar: (Waksman, S. A., The Actinomycetes, 1950). Jó növekedés figyelhető meg, 8 hetes növesztés után a telepek átmérője 2 cm. A telepek központi része kiemelkedik, szélei laposak, finoman barázdáltak. A micéliumok sárga színűek, jól látható oldódó pigment termelődik, ennek színe sárga. Sporangiumok elvétve figyelhetők meg. Czapek-pepton-agar: (2 g nátriumnitrit helyett 5 g pepton). A növekedés a Czapek-agaron megfigyelthez hasonló, de a telepek barázdáltsága, ráncosodása és felületének egyenetlenségei kifejezettebbek. Sporangiumok nem fejlődnek. Ahogy az előbbiekben röviden ismertettük, az A—4696 jelű antibiotikum termelésére az Actinoplanes ATCC 23 342 jelű törzset táptalajon tenyésztjük. A használt táptalajok igen sokfélék lehetnek. A gazdaságos termelési szint eléréséhez, a maximális hozam és az antibiotikum könnyű izolálása érdekében azonban előnyös bizonyos adott összetételű táptalajt használni. így, az egyik előnyösen alkalmazható szénforrás a keményítő, míg előnyös nitrogénforrásként szójalisztet használunk. Szénforrás lehet a melasz, glükóz, dextrin, glicerin és hasonlók. Nitrogénforrásként aminosavkeveréket, peptont és másokat is használhatunk. 3 A táptalajt a szokásosan használt disszociáló sókkal egészítjük ki, pl. nátrium-, kálium-, ammónium-, kalcium-, foszfát-, klorid-, szulfát-, acetát-, szénhidrát és más ionok jelenléte előnyös. A táptalajhoz fentieken kívül növekedési 10 faktorokat is adunk, pl. cefrét és élesztőkivonatot. Ezek előnyösen befolyásolják az A—4696 jelű antibiotikum termelését. Mint más mikroorganizmusok növekedéséhez és fejlődéséhez is szükségesek, az Actinoplanes faj tenyésztésekor 15 szintén kiegészítjük a táptalajt az alap-nyomelemekkel. Ezeket, mint szennyeződést a táptalaj egyéb összetevői már tartalmazzák. Az A—4696 jelű antibiotikum előállítására használt organizmus viszonylag széles pH-érté-20 kek között növekedik. Előnyös azonban a táptalaj pH-ját oltás előtt 6,5—7,2 közé állítani. Mint más Actinomyces törzsek tenyésztésekor is, a pH-érték a növekedési szakaszban változik, a fermentáció végére a táptalaj pH-ja általában 25 7,0—7,8-ra emelkedik. Az A—4696 jelzésű antibiotikum előállítására előnyösen süllyesztett, aerob tenyésztési körülményeket választunk. Rázott lombikos tenyésztéssel viszonylag kevés antibiotikum keletkezik, ezért nagyobb mennyiség előállítására steril fermentorban, aerob körülmények között tenyésztjük a termelő organizmust. A sterilézett táptalajt spóraszuszpenzióval vagy vegetatív oltóanyaggal beoltjuk. Ha spóraszuszpenzióva] oltunk, a növekedés csak hosszú lagfázis után indul meg, ezért oltóanyagként előnyösen vegetatív tenyészetet használunk. A fermentációs körülmények előnyös megválasztásával a növe-4 kedés megindulása előtti hosszú lagfázist lerövidíthetjük. A találmány szerinti eljárás előnyös megvalósítása szerint viszonylag kismennyiségű táp-5 talajjal vegetatív inokulumot készítünk oly módon, hogy a termelő törzs spóra- vagy micélium^szuszpenzió jávai oltunk, és a fiatal, aktív vegetatív inokulummal steril körülmények között -beoltjuk a főfermentációs táptalajt. Az inog„ kulumként használt vegetatív tenyészet táptalaja olyan összetételű, mint az A—4696 jelű antibiotikum előállítására használt főfermentációs táptalaj, de más is lehet. Az A—4696 jelű antibiotikumot termelő Acti-55 noplanes ATCC 23 342 jelű törzs 20 és 40 C° között növekedik. A legnagyobb mennyiségű A—4696 jelű antibiotikum 30 C° körüli hőmérsékleten keletkezik. A süllyesztett tenyésztésű fermentáció során 60 az aerob körülmények biztosítására steril levegőt buborékoltatunk keresztül a táptalajon. Az átáramoltatott levegő mennyisége előnyösen 0,1—1,0 térfogat levegő/táptalajtérfogat között változik. A legjobb növekedés és a maximális 65 antibiotikum termelés akkor következik be, ha 5