165465. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az AT-125 jelű antibiotikum előállítására

1654S5 13 •afiás oszlopba töltjük, és ülepedni hagyjuk, miközben a fenti oldószerrendszer felső fázisát az »szlopon keresztül engedjük. Az eluátum aktív rakcióit összegyűjtjük és szárazra pároljuk. A naradékot megfelelő oldószerből, előnyösen meanolból kristályosítva kristályos AT—lSS-öt :apurik. A fenti rendszerben oldószerként haszlálható még a 95%-os etanol, vizes butanol és 'ÍZ. Az AT—125 elkülönítésére a fermentációs kö;egből eljárhatunk úgy is, hogy a fermentlét pH 1—10 értéken Dowex 1 (OAc

-), vagy pH 6—7 éréken Dowex IR 45 (OH-) gyantával töltött oszopra töltjük, és miután az oszlopot vízzel mosuk, az AT—125 elkülönítésére vizes vagy metalolos ammónium-hidroxiddal vagy ecetsavval luálunk. Továbbá a szűrt fermentléből a hatónyag adszorbeáltatható szénen, és az AT—125 luálható megfelelő oldószereleggyel, például vies acetonnal. Alternatív tisztítási módszer szsilikagélen meanollal kloroformban vagy metilén-kloridban, ;agy benzol (vagy toluol), 95%-os etanol és ecetav elegyével végzett kromatografálás. A fermentleben az AT—125 titerét az elkülöitési eljárás különböző műveleti lépései során oronglemezes kísérlettel, a következő összetételi szintetikus táptalajon tenyésztett Bacillus subilist használva lehet követni: »inátrium-hidrogén-foszfát-heptahidrát 1,7 g 14 [álium-dihidro gén-foszfát 2,0 g ^mmónium-foszfát 1,0 g lagnézium-szulfát 0,1 g rlükóz 2,0 g iacto agaragar1 15,0 g lesztillált víz 1 liter fémionokat tartalmazó törzsoldat2 1 ml A Bacto agaragar a Difco Laboratories cég terméke. A törzsoldat összetétele a következő: "átrium-molibdát-dihidrát JobaIt(II)-klorid éz(II)-szulfát [aingán(H)-szulfát kalcium-klorid as(II)-klorid~tetrahidrát ink-klorid3 200 .«g/ml 100 «g/ml 100 ,«g/ml 2 mg/ml 25 mg/ml 5 mg/ml 5 mg/ml A cink-kloridot külön oldjuk fel 10 ml vízben, íelyhez egy csepp 0,1 n sósavoldatot adunk. A irzsoldatot felmelegítjük, hogy minden kompoens oldódjék, majd 24 órán át állni hagyjuk, és ;eril körülmények között szűrjük. Az így kapott szintetikus táptalajt beoltjuk a acillus subtilis spóráinak szuszpenziójával ,5X1010

sejt/ml) 0,5 ml/liter táptalaj arányban, fermentlémintákat 12,5 mm átmérőjű ahszoríns papírkorongokra 0,08 ml/korong arányban ilvisszük, a kiértékelni kívánt korongokat egy szakán át 37 °C-on inkubáljuk, és az inhibitá.si zónákat mérjük. A minta hatékonyságát az 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 inhibitálási zóna átmérője alapján a szokásos standard görbével értékeljük ki. A Bacillus subtilisszel beoltott szintetikus táptalaj felhasználható az AT—125 antibiotikum detektálására. Ezen eljárás során papírkromatogramokat hívunk elő n-butanol, metanol, benzol és víz 2:1:1:1 arányú elegyéből álló oldószerelegy felső fázisával. Az előhívás után a csíkokat megszárítjuk, majd elhelyezzük őket a beoltott táptalajt tartalmazó átlátszó papírkromaitogram elahívótálakba, és mintegy 20 perc után kiveszszük a tálakból a csíkokat. A tálakat egy éjszakán át a fentiekben ismertetett módon inkubáljuk, és az inhibitálási zónákat mérjük. Minthogy az AT—125 amfoter vegyület, sót képez savakkal, alkálifémekkel (ammóniával is), alkáliföldfémekkel (magnéziummal és alumíniummal is), valamint aminokkal. Fémsói előállíthatók, ha az AT—125-öt vízben feloldjuk, és a vizes oldathoz az előállítani kívánt fémsónak megfelelő fémet tartalmazó bázis híg oldatát addig adjuk, míg az oldat pH-értéke 7—8 lesz. Az AT—125 fémsói közül példaként megemlítjük nátrium-, kálium- és kalciumsóját. Aminsók, így primer, szekunder és tercier, mono-, di- és poliaminokkal alkotott sók szintén előállíthatók a fenti módon vagy más ismert módszerrel. Előállíthatók továbbá az ammóniumsók is jól ismert módon. Előállíthatók gyógyászatilag hatékony bázisokkal alkotott sók is, így additív gyógyászati hatás jelentkezik. Ilyen bázisok például a purinbázisok, így a teofillin, teobromin, koffein vagy e purinbázisok származékai; gyenge savakkal sót képző antiihisztamin-bázisok; piridin-származékok, így a nikotinsavamid és az izonikotinsavhidrazid; fenil-alkil-aminok; így az adrenalin és az efedrin; valamint a kolinok. Savakkal képzett sók előállíthatók, ha az AT —l'2!5^-öt megfelelő savval mintegy pH 7 alatti pH-értéken, előnyöisen mintegy pH 2—6-on kezeljük. Erre a oélra alkalmas savak például a sósav, kénsav, foszforsav, szulfaminsav és a hidrogénbromid. Az AT—125 savakkal és bázisokkal alkotott sói ugyanarra a biológiai célra alkalmazhatók, mint maga az AT—125. Az AT—125 aktív Escherichia coli ellen, és így felhasználható papírgyári berendezésekben az említett baktériumok okozta iszapképződés csökkentésére, meggátlására és megszüntetésére. Az AT—125 felhasználható a Trichomonas foetus, Trichomonas hominis és Trichomonas vaginalis tenyészetek élettartamának meghosszabbítására, minthogy megszünteti az Escheridhia coli okozta fertőzéseket. Az AT—125 használható továbbá gombásodásgátló szerként cipőfelsőrészekben. (Ezt a módszert általánosan a 3 130 505 gjámú Amerikai Egyesült Allamok-beli szabadalmi leírásban ismertették.) Az AT—125 aktív továbbá a Bacillus subtilis ellen, és így felhasználható az említett baktérium által halakban vagy haltároló ládákban okozott szag kiküszöbölésére, vagy az AT—125 felhasználható munkaasztalok és labo-