165337. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 17alfa- etinil- ösztriol- 3-cikloalkiléter-származékok előállítására

165337 2. táblázat Orálisan adagolt különböző ösztrogén hormonok hatása a ménre A méh átlagos Vegyület Szubkután dózis Mg/nap súlynövekedése mg + Specifikus hatás 17a-etinil-ösztriol-3-0,01 6,8 + 1,9 ciklopentiléter 0,03 15,3 + 1,0 0,1 47,3 + 5,2 0,4 48,8 ± 3,0 1,0 46,6 ± 1,9 Quinestradol 0,1 0,9 ± 1,0 0,3 1,7 + 0,8 1,0 11,7 + 2,7 3,0 42,3 + 4,0 17a-etinil-ösztriol 0,03 0,5 + 0,3 0,1 1,3 ± 1,3 0,3 2,9 + 0,9 1,0 5,8 + 1,4 összegyűjtjük. Az összegyűjtött szövetet Trisz-pufferban homogenizáljuk. Centrifugálással elkülönítjük a citoplazma-frakciót, a sejttörmelékeket és a sejtmagokat eltávolítjuk. 2 ml térfogatú citoplazma-frakcióhoz 2 /uCi ösztradiol-6,73

H-t (42,5 Ci/mM) adunk. 10 perc múlva 1 ml aliquot mennyiséget 100 mg finom üvegport tartalmazó kémcsőbe viszünk át. 30 perces inkubációs idő után a meg nem kötött ösztradiol eltávolítása céljából, háromszor pufferral mossuk az üvegport. A receptor-ösztradiol-6,73H-komplexet ezután etanollal elkülönítjük az üvegportól. A radioaktivitást folyadékszcintülációs-spektrométerrel határozzuk meg. A citoplazma-frakció által in vitro megkötött radioaktív ösztradiol mennyiségének csökkenése azt jelzi, hogy a szövetet előzőleg ösztrogén hormon hatása érte, ami csökkentette az ösztrogén hormonokat megkötő proteinek kötó'képességét. A 3. ábrán a fenti kísérlet ösztradiollal és 17a-etinil-ösztriol-3-ciklopentiléterrel kapott eredményeit ábrázoljuk. A keskeny összefüggő vonal a 3 H-ösztradiol és a kont"roll méhszövet kötődését jelzi. A keskeny szaggatott vonallal a kontroll vaginalis szövethez való kötődés mértékét tüntetjük fel. A 17a-etinil-ösztriol-3-ciklopentiléter 0,3 jug/patkány mennyiségben csökkenti a vaginalis szövet kötőképességét (3—B görbe), de nem csökkenti a méhszövet kötőképességét (3-A görbe). 5 Ezt az eredményt az jelzi, hogy a 17a-etinil-ösztriol-3-ciklopentiléter előnyös vaginalis hatása meghosszabbított, míg az uterusra nem hat. Ezzel ellentétben, az ösztradiol a méhszövet (3—C görbe) és a vagina (3-D görbe) ösztrogén hormonokat megkötő proteinjeit 10 körülbelül hasonló mértékben telíti. A 3. táblázatban a 3. ábra grafikusan ábrázolt adatait számszerűen adjuk meg. A 3. táblázatban az adatokat a különböző időintervallumokban percenként, 1 ml citoplazma-frakcióból mért beütések 15 számával (cpm) adjuk meg. A 17a-etinil-ösztriol-3-ciklopentilétert ösztrogénhormonelégedetlenség, különösen spontán vagy indukált menopausalis syndroma keletkezésekor átlagosan 5-500 jug/nap mennyiségben használjuk. A fenti 20 mennyiség megtartásával a vegyületet naponta, vagy ha szükséges, hoszabb időközönként adagolhatjuk. Mivel a vegyület orálisan adagolva hatásos, menopausalis syndroma. kezelésekor orális úton adagoljuk. 3. táblázat Az ösztradiol és a 17a-etinil-ösztriol-3-ciklopentiléter kölcsönhatása az uterus és a vagina ösztrogén Dózis reciptoraival szub- Percenkénti beütések száma/ml citoplazma frakció kután Adagolás utáni idő (óra) (Mg) 0 4 24 48 uterus vagina uterus vagina uterus vagina uterus vagma Kontrol O 17a-etinil-ösztroil-3--ciklopentiléter 0,3 ösztradiol 0,3 20,362 16,439 19,312 11,966 16,444 7,464 23,132 13,058 10,229 10,590 21,630 17,067