165192. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új antibiotikum előállítására

165192 és Cl=3,39%. Az A 477 antibiotikum fajlagos forgatása 25 °C hőmérsékleten, 50%-os vizes metanollal készült, bázisra vonatkoztatva 1%-os oldatában vizsgálva —66,6°. Az A 477 jelű vegyület hidrokloridja fehér színű, kristályos anyag, olvadáspontja 207—212 °C, oldható meleg vízben, igen jól oldódik meleg, 50%-os metanolban. Az A 477 jelű antibiotikum hidrokloridja 27 °C hőmérséklet alatt, oldatban, pH 1 és pH 10 között stabil. A só vízben kivitelezett elektrometrikus titrálás során egy 6,2-es és öt vagy több, 8 és 10,5 pK-értékkel jellemezhető csoport, míg dimetilformamid és víz 2:1 arányú elegyében végzett elektrometrikus titrálás során két, 7,0-es, illetve 9,7-es és két vagy több 1 I-nél nagyobb pK-értékkel jellemezhető csoport jelenléte mutatható ki. Az A 477-hidroklorid gőznyomás-ozmotikus eljárással meghatározott molekulasúlya: legkevesebb 1480. Több elemanalízis adatainak átlaga szerint az A 477 jelű antibiotikum hidrokloridjának elemösszetétele hozzávetőlegesen: C=55,36%; H= 6,0:2%; N=5,73%; 0=28,99%; összes Cl=4,52% és szervetlen Cl=l,28%. Az A 477 hidrokloridjának ásványolajban vizsgált infravörös abszorpciós spektrumában (lásd a mellékelt rajzot) a következő hullámhosszúságokon figyelhető meg abszorpciós maximum: 3,0, 5,8, 6,02, 6,3, 6,62, 6,84, 7,02, 7,26. 7,32, 7,7, 8,1, 8,27, 8,52, 8,97, 9,35, 9,7, 9V

8, és 10,1 mikron. Az A 477 hidrokloridjának savas és semleges pH-jú vizes oldatában vizsgált ultraibolya abszorpciós spektrumában a 283 m.« hullámhosszúul % ságon figyelhető meg maximum (Ej c

= 70), míg lúgos pH-jú oldatában a 300 és 362 m« hul-1% lámhosszúságokon látszik maximum (E^ = = 60, illetve 53). Az A 477 jelű antibiotikum hidrokloridjának a megadott oldószerelegyekkel végzett papírkromatográfiás Rr

értékei — Bacillus subtilis-szel végzett bioautográfiás meghatározás alapján — a következők: 1. táblázat Oldószerelegy Rr-érték Vízzel telített butanol 0,05 2% p-toluolszulfonsavat tartalmazó vízzel telített butanol 0,26 Metanol, aceton és víz 19>:6:75 arányú elegye 0,84 Metanol és 0,1 n HCl 3:1 arányú elegye 0,40 1% p-toluolszulfonsavat tartalmazó vízzel telített metilizobutilketon 0,62 Az A 477 jelű vegyület több mikroorganizmus: növekedését gátolja. A megadott organizmusokkal szemben növekedésgátló koncentrációkat a 2. táblázatban adjuk meg. 2. táblázat Az A 477-hidroklorid antibakteriális hatása Vizsgált mikroorganizmus Legkisebb növeke.' désgátló koncentráció («g/ml) 10 15 35 30 40 45 50 55 60 65 Staphylococcus aureus Bacillus subtiiis Mycobacterium avium Streptococcus faecalis Vibrio coli (Iowa 10) Mycoplasma gallisepticum Pasteurella multocida Pasteurella hemolytica *agar-diffúziós módszer **hígítási sor. 25,0* 1,58* 25,0* 3,12* 25,0** 50,0** 50,0** 50.0** 20 Az A 477-hidroklorid egereken meghatározott és LDr.o-értékben kifejezett akut toxicitása intraperitoneális adagolással 350 mg/testsúly kg. Az A 477 jelű antibiotikum hidrokloridja egereknek szubkután adagolva fertőző mikroorganizmusok növekedését in vivo gátolja. A 3. táblázatban az EDso-értékben kifejezett (a vizsgált állatok felét hatékonyan védő) hatóanyagmennyiséget adjuk meg, abban az esetben, ha az antibiotikumot két adagban adagoltuk: 3. táblázat 35 Fertőzést okozó mikroorganizmus ED;,« Staphylococcus aureus 3055 Streptococcus pyogenes Diplococcus pneumoniae 83 mg/kg 1.0 mg/kg 5.1 mg/kg Az A 477 jelű antibiotikum egy másik fontos tulajdonsága, hogy a fogak romlását elősegítő mikroorganizmusok növekedését gátolja. Folyékony halmazállapotú táptalajjal, hígítási sorban végzett kísérletek szerint az A 477 hidrokloridja az Odontomyces viscosus kariogén mikroorganizmus növekedését 1,0 «g/ml-es koncentrációban gátolja. Az A 477-hidroklorid kariogén mikroorganizmusokkal szemben mutatott antimikrobiális hatását a következő kísérlettel bizonyítjuk: 5% szacharózt tartalmazó táptalajt kémcsövekbe töltünk és beoltjuk a kariogén mikroorganizmussal. A kémcsövekbe, a táptalaj felszíne alá süllyesztve, vékony üvegbotot helyezünk. Egy éjszakán át, 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk a tenyészetet. Reggel az üvegbotok felszínén elsősorban sejtekből és dextránból álló képződményeket figyelhetünk meg. Az üvegbotokat ezután különböző mennyiségű A 477-hidrokloridot tartalmazó oldatokba helyezzük és 5, 10 és 15 percen át benne hagyjuk. Miután a megfelelő idő letelt, az üvegbotokat steril ionmentes vízzel leöblítjük és friss, steril táptalajba helyezzük. Ezután 18—24 órán át 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk a táptalajt. A mikroorganizmus esetié-