165090. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-alfa-hidrazino-béta -fenil- propionsav-származékok előállítására

165090 3 4 1. táblázat 10 15 20 A találmány szerinti eljárás, mint említettük, az (I) általános képletű vegyületek előállítására vonatkozik. Különösen jó hatásúak azok az (I) általános képlet szerinti vegyületek, amelyekben a propionsav a-helyzetben metil- vagy etil-csoporttal van szubsztituálva. így például az L-a-hidrazino-a-alkil-<3-(3,4-dihidroxifenil)-propionsavak emlősökben 0,05-100 mg/kg napi dózisban hatásosak. A találmány szerinti eljárással előállítható vegyületeket gyógyászatilag alkalmazható sók formájában is használhatjuk, így alkalmazhatjuk a karboxilcsoport alkálifém- vagy ammóniumsóját vagy az aminocsoport hirdokloridját, hidrobromidját, szulfátját stb. Célszerűen azonban a szabad aminosavat és nem a sókat alkalmazzuk. A találmány szerinti eljárással előállítható vegyületek biológiai hatásosságát az alábbi vizsgálatokkal igazoljuk: Dekarboxiláz-gátlás vizsgálata emlősökön A vizsgálatnál 18-22 g súlyú nőstény fehéregereket alkalmaztunk. Az állatoknak perorálisan, oldatban vagy vizes szuszpenzióban az alábbiakban megadott mennyiségű L-a-hidrazino-0í-metil-i3 -(3,4-dihidroxi-fenil)-propionsawal együtt 80 mg/kg L-dopát (L-3,4-dihidroxi-fenilalanin) adagoltunk. Az adagolás 2

$ után 90 perccel az állatokat dekapitáltuk, agyukat eltávolítottuk és hetes csoportokban összegyűjtöttük. A dózisok vizsgálatához 3-3 ilyen csoportot alkalmaztunk; a kapott értékekből átlagot számítottunk. Az összegyűjtött agyakat 0,4 n perklórsawal homogenizáltuk; 1 g szövetre vonatkoztatva 9 ml savat használtunk fel. A pirokatechin-aminokat és pirokatechin-aminosavakat alumíniumoxidon adszorbeáltuk, majd eluáltuk. A dopát és dopamint 200-400 mesh méretű Amberlite CG-50 ioncserélő gyantát tartalmazó kromatográfiás oszlop segítségével különítettük el egymástól. A dopát és a dopamint ezután jóddal oxidáltuk és fluorimetrikusan határoztuk meg. (Porter, C.C., Totaro, J.A. és Bercin, A. J. Pharmac. Exp. Therap. 150 17 (1965)). A fenti, három csoport adatából számított átlagos értékeket és a kontrollcsoport vizsgálati értékeit az alábbi 1. táblázatban ismertetjük: rozino-a-metil-0- (3,4-dihidroxi-fenil)-propionsavat adagoltunk perorális úton az állatoknak különböző dózisokban. (A metocell nevű szuszpendáló szer metilcellulóz 1%-os vizes oldata.) A rezerpienes kezelés után 2 órával az állatok intraperitoneális úton 150 mg/kg L-dopát kaptak. További 1 óra múlva -kontrollállatok alkalmazásával - megvizsgáltuk az állatok lokomotoros gátoltságát és a ptózis fennállását. A lokomotoros gátlást úgy határoztuk meg, hogy az egereket 15 másodperc időre egyenként 20 X 25 cm méretű drótháló-rácsra helyeztük. Gátoltnak tekintettük a lokomotoros aktivitást, ha az állatok nem sétáltak fel-alá a rács sarkai között. (A rezerpinnel kezelt egereknél általában legfeljebb az állatok 15%-a mászkált a rácson.) A rezerpinnel nem kezelt állatok ez alatt az idő alatt állandóan fel-alá mászkáltak a rácson. Ptózisként értékeltük a szemhéj legalább 50%-os zártságát. 2. táblázat Racém, LX és L-cehidrazino-cemetil-ß-(3,4-dihidroxi-fe-nil)-propionsav potenciáló Itatásának összehasonlítása rezerpinnel kiváltott lokomotoros gátlás és ptózis L-dopával történő antagonizálásánál 30 35 40 45 kontroll racemát L-forma Dózis mg/kg dopa /ig/g dopamin /zg/g 20 10 0,05 3,60 2,85 130" 3,05 2,68 50 Mint a táblázatból látható, 10 mg L-vegyület aktivitása a vizsgálat szerint kb. azonos 20 mg DL-(racém) termékével. Ez azt jelenti, hogy a vizsgálat szerint az L-módosulat lényegileg kétszer olyan 55 aktív, mint a racemát. Racém, D- és L-a-hidmzino-a-metil-ß-{'3,4-dihidroxifenil)-propionsav potenciáló hatásának összehasonlítása rezerpinnel kiváltott lokomotoros gátlás és ptózis L-dopával történő antagonizálásánál 60 Egereket átlátszó műanyag egérkalitkába helyeztünk és egy éjszakán át szoktattuk a környezethez. Másnap az állatoknak intraperitoneálisan 4 mg/kg rezerpint adtunk, majd a rezerpin-adagolás után 1 órával metocellben szuszpendált racém, L- és D-a-hid- 65 A rezerpinnel A rezerpinDózis kiváltott lokonel kiválElőmg/kg motoros gátlás tott ptózis kezelés3 p. 0. ellen megvéellen megdett egerek védett egeszama rek száma (a második számjegy a vizsgált állatok száma) metocell 1/10 1/10 D-izomer + metocell 5,0 1/10 1/10 25,0 2/10 2/10 125,0 2/10 3/10 L-izomer + metocell 0,2 3/10 2/10 1,0 5/10 7/10 5,0" 8/10 9/10 '5 0 0,86 mg/kg 0,56 mg/kg Megjegyzések: a) 1 órával az i. p. adagolt 150 mg/kg L-dopa beadása előtt alkalmazva. b) az L-a-hidrazino-a!-metil-(3-(3,4-dihidroxi-fenil)propionsav szóbanforgó dózisa a metocell előtt adagolva nem fejtett ki rezerpin-antagonista hatást. c) A 150 mg/kg i. p. adagolt L-dopával kombinálva alkalmazott a-hidrazino-a-metil-/3-(3,4-dihidroxifenil)-propionsav becslés szerinti 50%-os rezerpin antagonizáló dózisa egéren. A 2. és 3. táblázatban L-dopa (150 mg/kg) hatását mutatjuk be egerek rezerpinnel kiváltott lokomotoros gátlására és ptózisára. Az állatokat előzőleg különböző dózisú racém, D- és L-a-hidrazino-a-metü^-(3,4-dihidroxi-fenil)-propionsawal kezeltük. Az L-dopa 150 mg/kg-os i.p. dózisa metocellel előkezelt állatokon nem fejt ki rezerpin-antagonista hatást. A 2