164986. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új acth-jellegű polipeptidek előállítására
19 164986 20 R} = 0,61, R^= 0,74; Rf = 0,92. Analízis Ci7 7H2 39046N4 3S.4H 2 Oképlet alapján: számított: C = 55,6%, H = 6,5%, N = 16,3%; mért: C = 55,3%, H = 6,6%, N = 16,1%, S =0,82%. (2) Albu1 -a 1 " 2 3 kortikotropin-Tyr a -?NH 2 acetát 500 mg az (1) pontban leirt módon előállított védett trikozapeptid, 0,7 ml anizol, 0,05 ml merkaptoetanol, 0,5 ml CH3 -S-CH 2 -CH 3 és 10 ml vízmentes hidrogénfluorid elegyét 0 C° hőmérsékleten 50 percig keverjük, majd a hidrogénfluoridot csökkentett nyomáson lepároljuk. A maradékot 50 ml vízben oldjuk, és az oldatot háromszor 20-20 ml n-butanollal mossuk. A vizes fázist 75 ml Amberlite IRA-410 (acetát-ciklusú) gyantával töltött oszlopon engedjük át, és az oszlopot 0,1%-os vizes ecetsavoldattal mossuk. Az egyesített eluátumokat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 10 ml 1%-os vizes tioglikolsavoldatban oldjuk, és a kapott oldatot 50 C° hőmérsékleten 12 órán át nitrogénatmoszférában tartjuk. A keletkezett oldatot 400 ml vízzel hígítjuk, es 2,5 x 25 cm méretű, karboximetilcellulózzál töltött oszlopra visszük fel, mely oszlopot 500 ml 0,1 mólos ammóniumacetátpufferrel (pH = 6,5), és 500 ml 0,2 mólos ammóniumacetátpufferrel (pH 6,5) és 500 ml 0,2 mólos ammóniumacetátpufferrel (pH 6,5) mosunk, ebben a sorrendben. Ezután a kívánt terméket 300 ml 0,4 mólos ammóniumacetátpufferrel (pH = 6,8) eluáljuk. Az eluátumot 3 x 20 cm méretű Amberlite XAD-II (200-250 mesh) oszlopra visszük fel, és az oszlopot 0,2 mólos ammóniumacetáttal mossuk, majd a tiszta terméket gradiens elucióval eluáljuk, 0,2 mólos ammoniumacetat- 50%-os vizes etanol (400—400 ml) rendszert alkalmazva. A termék körülbelül a 200. és 600 ml között eluálódik, az eluátumot bepároljuk, majd súlyállandóságig liofilizáljuk. A kitermelés 240 mg Albu-'a 1-23 -kortikotropin-Tyr23-NH 2 -acetát. [a]|j2 : -78,2° (c = 0,5, 1%-os vizes ecetsavban); Rj 0.55. Papírelektroforézis: piridin-ecetsav-viz (1:10:89) rendszerben: Albu1-« 1 " 2 ? -kortikotropin-Tyr"-NH2 Aminosavanalízis: (5,7 n HCl, 105 C°, 20 órás hidrolízis): Lys:4,03; His: 1,01; Arg: 3,00; Ser: 0,89; Glu: 0,98; Gly: 2,02; Pro: 2,00; Val: 2,97; Met: 0.89; Tyr: 2,04; Phe: 1,00; Albu: 0,94; Try: 0,94 (UV-spektrum) 8. példa Az 1., 2., 3., 5. vagy 7. példa végtermékét kis mennyiségű vízben oldjuk. A vizes oldathoz 8 mólekvivtakns mennyiségű sósavat adunk. A reakcióelegyet liofúizálvaa megfelelő hidrokloridokat kapjuk. 9. példa A 4. péWa végtermék*', kis mennyiségű vízben oldjuk. A vizes oldathoz 7 mólekvivalens mennyiségű sósavat adunk. A keletkezett elegyet liofilizálva a Sar'-^Sfcortikotropin- Val20 -NH 2 hidrokloridját kapjuk. 10. példa A 2., 3., 4., 5. vagy 7. példák végtermékeit a 6. példa szerinti eljárással kezelve a megfelelő 5 cinkkomplexet állíthatjuk elő. 10 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás X-Tyr- Ser-Met-Glu- His-Phe-Arg-Try- Gly-Lys-Pro -Val- Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-P (I) 15 (I) általános képletű polipeptidek, - mely általános képletben X H-Albu- vagy H-Sar-gyök, és ha X H-Albu-gyök, P jelentése -Pro-Val-Lys-Val-Tyr-NHj vagy -Pro-Val-Lys-Val-Tyr- Pro-OH gyök, ha pedig X H-Sar-gyököt jelent, P jelentése -Pro-Val-NH2 20 , -Pro-Val- Lys-Val-Tyr-NH2 vagy -Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-OH gyök, ezek fiziológiailag megfelelő savaddiciós sóinak, és nehézfémkomplexeinek előállítására, azzal jellemezve, hogy 25 a) egy -X-Tyr-Ser-OH (Ha) (IIa) általános képletű védett tripeptidszármazékot, melyben X jelentése a fent megadott, a -Ser-OH gyök karboxil-csoportja aktivált, és a H-Sar-gyök 30 -NH-csoportja vagy a H-Albu-gyök aminocsoportja védőcsoporttal védett, H- Met-Glu-His- Phe-Arg-Try- Gly-Lys-Pro- Val-Gly-Lys- Lys-Arg-Arg-P' (II) (II) általános képletű polipeptidszármazékkal 35 reagáltatunk, mely képletben ha X jelentése H-Sar-gyök, P' -Pro-Val-NH2 , -Pro-Val-Lys-Val-Tyr'NH2 vagy -Pro-Val-Lys- Val-Tyr-Pro-OH gyököt, ha pedig X jelentése H-Albu-gyök, P' -Pro-Val-Lys-Val-Tyr- NH2 vagy -Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-OH gyököt 40 jelent, a -Lys-gyök w-amino-csoportja védett, és a -Glu-gyök gamma-karboxilcsoportja, a C-terminális karboxilcsoport és az -Arg-gyök guanidincsoportja egyaránt tartalmazhat védőszubsztituenst, vagy 45 b) egy X-Tyr-Ser-Met-OH (Illa) (Illa) általános képletű védett tetrapeptidszármazékot, melyben X jelentése a fent megadott, a s0 -Met-ÓH-gyök karboxilcsoportja aktivált, és a H-Sar-gyök NH-csoportja vagy a H-Albu-gyök aminocsoportja védőcsoporttal védett, H- Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys- Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-P' (III) 55 (III) általános képletű polipeptidszármazékkal reagáltatunk, mely képletben P' jelentése a fent megadott a -Lys-gyök co-aminocsoportja védett, és a H-Glu-gyök gamma-karboxilcsoportja, a C-terminális 50 karboxilcsoport és az -Arg-gyök guanidincsoportja egyaránt tartalmazhat védőszubsztituenst, vagy c) egy X- Tyr-Ser-Met-Glu -His-Phe-Arg- Try-Gly-OH (IV) 65 (IV) általános képletű dekapeptidet, mely képletben X jelentése a fent megadott, a -Gly-OH-gyök karboxilcsoportja aktivált és a H-Sar-gyök 10
