164986. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új acth-jellegű polipeptidek előállítására
17 164986 18 pároljuk. A maradékot 400 ml etilacetátban oldjuk, majd az etilacetátos'- oldatot 1 n sósavoldattal, 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonátoldattal és vízzel mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk, és vákuumban bepárolva szirupos maradékot kapunk. Termelés 31 g. A maradékot 200 ml metanolban oldjuk, és az oldathoz 14 ml hidrazinhidrátot adunk. A reakcióelegyet 12 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd az oldószert vákuumban lepárolva kristályos anyagot kapunk. Ezt vizes metanolból átkristályosítva 28 g hidrazidot kapunk. Rj- = 0,64. Analízis a C18 H 2 g 0 5 N 4 képlet alapján számított C = 56,82%, H = 7,42%, N = 14,73%; mért: C = 56,73%, H = 7,51%, N = 14,76%. (2) BOC-Albu-Tyr-Ser-OCHs 16 g BOC-Älbu-Tyr-NH-NHj vegyületet oldunk 100 ml dimetilformamid és 60 ml 2 n sósavoldat elegyében, és ehhez 6 ml 2 n nátriumnitritoldatot adunk -5 és -10 C° közötti hőmérsékleten, 7 perc alatt. A reakcióelegyet ezután 300 ml jéghideg telített vizes nátriumkloridoldattal hígítjuk. A kivált azidot elválasztjuk, és jéghideg etilacetáttal extraháljuk (2 x 200 ml). Az etilacetátos oldatot jéghideg 5%-os vizes riátriumhidrogénkarbonátoldattal és telített vizes nátriumkloridoldattal mossuk, és nátnumszuffát felett szárítjuk. Ezt az azidoldatot 7,8 g H-Ser-OCH3 és 7,5 ml irietilamin 150 ml etilacetátos oldatához adjuk, és az legyet 0 C°-on két órán át keverjük. A reakcióelegyet 4%-os vizes nátriumhidrogénkarbonátoldattal, 1 n sósavoldattal és vízzel mossuk, majd a szerves fázist nátriumszulfáttal szárítjuk, és az oldószert vákuumban lepároljuk. A maradékot etilacetát-petroléter elegyből átkristályosítva 10j8 g BOC-Albu-Tyr- Ser-OCH3 keletkezik. Rj = 0,58 Analízis a C22 H 33 0 8 N 3 képlet alapján: számított: C = 56,52%, H = 7,12%, N = 8,99%; mért: C = 56,44%, H = 7,23%, N = 9,13%. (2) BOC-Albu-Tyr- Ser- NH-NH2 10 g BOC-Albu-Tyr-Ser-OCH3 100 ml metanolos oldatához 10 ml hidrazinhidrátot adunk és az elegyet 8 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. Az oldószert vákuumban lepároljuk, és a maradékot éter-petroléter elegyből átkristályosítjuk. Termelés 9,3 g. R} = 0,21. Analízis a C2 ir^O! 7N 5 - képlet alapján: számított: C = 53,95%, H = 7,12%, N = 14,98%. mért: C = 53,80%, H = 7,41%, N = 14,83%. (3) H -Albu-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe- Arg-Try-Gly -Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys- Arg-Arg-Pro -Val- Lys-Val- Tyr-Pro-OH acetát 3 -1) Amin komponens OtBu JBOC 600 mg H-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly- Lys4>ro-Val-Gly-BOC BOC BOC Lys-Lys-Arg-Arg-Pro- Val-Lys- Val-Tyr-Pro-OtBu tetraecetsav addíciós sót és 0,27 ml trietilamint oldunk 2 ml dimetilformamid és 1 ml piridin elegyében. Az oldatot -5 C°-ra hűtjük. 5 (3-2) Azidoldat 200 mg BOC-Albu-Tyr-Ser-Met- NH-NH2 4 ml dimetüformamidos oldatához -10 C°-on keverve 0,3 ml 4 n sósavoldatot adunk. Az elegyet 10 percig -10 C°-on keverjük. 10 (3—3) Kapcsolás A fenti azidoldatot hozzáadjuk az aminkomponens dimetüformamidos oldatához, és az elegyet 40 órán át 0 C°-on keverjük. Az oldatot ezután vákuumban 15 kis térfogati» pároljuk, majd 20 ml jéghideg vízzel hígítjuk. A keletkezett csapadékot lecentrifugárjuk, és vízzel és éterrel mosva 730 mg amorf sárgás port kapunk. A port a 4. példa (3). pontjában leírt módon trifluorecetsawal kezeljük, a keletkezett terméket 20 ugyancsak a 4. példa (3) pontja szerinti módon karboximetilcellulóz oszlopon tisztítjuk, és %y kapjuk a kívánt pep ti dace tatját. A pepiid szerkezetét aminosavanalizátoron vizsgáljuk. ?5 6. példa 10 mg SarUai-24 kortikotropin acetátot (melyet az 1. példa (6) pontjában állítottunk elő) 5 ml 30 desztillált vízben oldunk. Az oldathoz 74 mg ZnCl2 2 ml vizes oldatát és 30 mg Na2 HP0 4 .12 H 2 0 2 ml vizes oldatát adjuk. Az elegyet vízzel 20 ml-re hígítjuk, és a pH-t 8,0 és 8,5 közé állítjuk keverés közben. A keletkezett gélt lecentrifugálva Sarlql-24 35 -kortikotropin cinkkomplexet kapunk. 7. példa 40 (1) Z-Albu-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg(NO a >Try Gly-Lys(Z)- Pro- Val-Gly-Lys(Z)-Lys(Z)- Aig<N02) -Arg(N02 >Pro-Val-Lys(Z)- Val-Tyr-NH 2 150 mg Z-Albu-Tyr-Ser- NH-NH2 0,3 ml 6 n sósav 45 és 5 ml dimetilformamid elegyével készített oldatához -10 C° hőmérsékleten 0,1 ml 4 n nátriumnitritoldatot adunk. A reakcióelegyet 0,18 ml trietilaminnal semlegesítjük és vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk. Az így nyert azidoldatot leszűrjük és a szűrletet 50 H-Met-Glu-His-Phe-Arg(N02 )Try-Gly-Ly<Z> Pro-Val-Gly-Lys(Z)- Lys(Z>Arg(N02 >Arg(N0 2 ) -Pro-Val-Lys(Z)-Val-Tyr-NH2 hideg dimetilformamidos oldatához adjuk, mely peptidet 665 mg BOC-Met-Glu(OtBu> His-Phe-Arg(N02 ) -Try-Gly-Lys(Z)-Pro-55 Val-Gly-Lys(Z> Lys(Z> Arg(N02 ) -Arg(N0 2 )-Pro-Val-Lys(Z>Val-Tyr-NH2 vegyületből állítottunk elő az ismert trifluorecetsavas módszerrel. Az elegyet 6 órán át -5 C°-on keverjük. Ezután a reakcióelegyhez további azidoldatot adunk, melyet a fenti módszer 60 szerint 70 mg megfelelő hidrazidból készítettünk. A reakcióelegyet 24 órán át állni hagyjuk, 0 C° hőmérsékleten, és az elegyhez 50 ml jéghideg étert adva finom porként kicsapjuk a kívánt terméket. A port leszűrjük, majd szilikagélen végzett 55 oszlopkromatográfiával tisztítjuk a szokásos módon. A kitermelés 590 mg. Op: 200-208 C° (bomlás közben), [a]7 A : -32° (c = 0,5 dimetilformamidban),
