164986. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új acth-jellegű polipeptidek előállítására
13 164986 14 UV: Xjjif Na0H : um O " 283,5 (25,0), 290 (25,8) R| = 0,54. Papírelektroforézis: piridin-ecetsav-víz (1:10:89 tf) Az így nyert polipeptid kémiai szerkezetét aminosavanalizátoron is vizsgáltuk. 3. példa 10 (1) Z-Albu-Tyr-NH-NH2 23 g H-Tyr-OCH3 vegyületből, 14 ml trietilaminból és 400 ml acetonitrilből készített oldathoz 19 g Z-Albu-OH-t és 20 g diciklohexilkarbodiimidet adunk 15 0 C°-on, és az oldatot ezen a hőmérsékleten 24 órán át keverjük. A reakcióelegyet szűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 400 ml etilacetátban oldjuk, és az oldatot 1 n sósavoldattal, 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonátoldattal és vízzel mossuk, 20 nátriumszulfát felett szárítjuk, és így 32 g szirupos maradékot kapunk. Ezt 200 ml metanolban oldjuk, és az oldathoz 14 ml hidrazinhidrátot adunk. A reakcióelegyet egy éjszakán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd az oldószert vákuumban ledesztillalva 25 kristályos terméket kapunk. Ezt vizes metanolból átkristályosítva 27 g, 144-149 C° (bomlás közben) olvadáspontú hidrazidot kapunk. Ri = 0,61. Analízis a C21 H 2 6 0 5 N 4 képlet alapján: 3Q számított: C = 60,85%, H = 6,32%, N = 13,52%: mért: C = 60,66%, H = 6,58%, N = 13,58%. (2) Z-Albu-Tyr-Ser-OCH3 12,42 g Z-Albu-Tyr-NH-NH2 vegyületet oldunk 100 ml dimetilformamid és 60 ml 2 n sósav elegyében. Az elegyhez 5 perc alatt -5 és -10 C° közötti hőmérsékleten 8 ml 2 n nátriumnitritoldatot adunk. A reakcióelegyet ezután 300 ml jéghideg, 4Q telített vizes nátriumkloridoldattal hígítjuk. Az előállított azidvegyületet kétszer 200-200 ml jéghideg etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátot jéghideg 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonátoldattal és telített vizes nátriumkloridoldattal mossuk, majd .,nátriumszulfát felett szárítjuk. Az azidoldatot 80 ml etilacetátból, 20 ml dimetilformamidból, 4,7 g H-Ser-OCH3 .HCl-ből és 4,2 ml trietilaminból készített oldathoz adjuk, és az elegyet 46 órán át 0 C°-on keverjük. A reakció ^n elegyet 4%-os vizes nátriumhidrogénkarbonátoldattal, 1 n sósavoldattal és vízzel mossuk. A szerves fázist nátriumszulfát felett szárítjuk, és az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot etilacetát-petroléter elegyből kikristályosítva 9,7 g kívánt 55 vegyületet kapunk, melynek olvadáspontja: 169,5-170,5 C° (bomlás közben) R^ = 0,54 [ajf/ = 43,0° (c = 1,0, metanolban). Analízis a C2 5 H 31 0 8 N 3 képlet alapján: számított: C = 59,87%. H = 6,23%, N = 8,38%; 60 mért: C = 59,83%, H = 6,13%, N = 8,61%. CU 7-41bu-Tvr-Ser-NH-NH2 9gZ-Albu- ryr-Ser-OCH3 100 ml metanolos oldalához iü mi hidrazinhidrátot adunk, és az elegyet g5 10 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, majd a maradékot éterből kikristályosítjuk. Termelés 8,2 g o.p.: 149,5—151,0 C° (bomlás közben) R^ = 0,18, [a]g = 48,0° (c = 1,0, dimetilformamidban). Analízis a C2 3 H 2 9 0 7 N 5 képlet alapján-. számított: C = 56,66%, H = 6,00%, N = 14,73%. (4) N02 Z I I Z-Albu-Tyr-Ser-Met-Glu- His-Phe- Arg -Try-Gly-Lys-Pro-Z Z N02 N0 2 Z llll I -Val-Gly-Lys-Lys -Arg-Arg-Pro-Val-Lys -Val-Tyr-Pro-OH (4-1) 3,4 g OtBu N02 Z I I I BOC-Met-Glu -His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys -Pro-Val-Gly-Z I -Lys-Z N02 N0 2 Z III I -Lys-Arg-Arg- Pro-Val-Lys- Val-Tyr-Pro-OH vegyületet 30 ml, 0,1 ml tioglikolsavat tartalmazó trifluorecetsavban oldunk, és 15 C°-on keverjük 25 percig. Az oldatot körülbelül 10 ml-re pároljuk be, vákuumban, és a terméket 100 ml éter hozzáadásával kicsapjuk. A csapadékot leszűrjük, és vákuumban nátriumhidroxid felett szárítjuk. A száraz port 20 ml dimetilformamidban oldjuk, és az oldathoz 0,5 ml trietilamint adunk, majd -20 C -ra hűtjük. (4-2) 633 mg Z-Albu-Tyr-Ser-NH- NH2 vegyületet 15 ml dimetilformamid és 1 ml 6 n sósav elegyében oldunk, és az oldathoz 0,4 ml 4 n nátriumnitritoldatot adunk -5 C°-on. Az elegyet 20 percig -5 C°-on keverjük, majd 0,9 ml jéghideg trietilamint adunk hozzá, végül nátriumszulfát felett szárítjuk. A szárazoldatot leszűrjük és a szűrletet a (4—1) pontban nyert oldathoz adjuk. Az elegyet 6 órán át -10 C°-on, és további 10 óráig 0 C°-on keverjük. A reakcióelegyhez a fenti eljárással 320 mg Z-Albu-Tyr-Ser-NH-NH2 -ből frissen készített azidoldatot adunk, és az elegyet 24 órán át 0 C°-on keverjük. A terméket jéghideg éter hozzáadásával kicsapjuk, és szűrjük. A keletkezett csapadékot etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:20:6:11) elegyben oldjuk, és az oldatot szilikagéles oszlopra visszük fel, és ugyanezzel az eleggyel eluáljuk. A termék hamarosan eluálódik, a fő frakciót elkülönítjük és vákuumban szárazra pároljuk. A maradékhoz jeges vizet adunk, és így egy mikrokristályos port kapunk, melyet leszűrünk, és 1%-os ecetsavval és vízzel mosunk. Termelés 3,2 g o.p.: 170 C° (bomlás közben), 145 C°-on zsugorodik), [a]jf = -31,6° (c = 0,5,dimetilformamidban), R\ = 0,0,R£ =0,55. (5) H-Albu-Tyr-Ser-Met-Glu -His-Phe-Arg-Try- Gly-Lys-Pro- Val-Gly-Lys-Lys- Arg-Arg- Pro-Val-Lys- Val- Tyr -Pro-OH acetát 7
