164958. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vinkrisztin vagy savaddiciós sóihozamának növelésére a vinkrisztinnek a Vinca Rosea L. növényből történő elkülönítése során
164958 5 ismertetett módon kapott nyers alkaloid szulfátelegyet mintegy negyvenszeres mennyiségű vízben oldjuk, majd a vizes oldatot vizes ammóniumhidroxid oldattal pH=5-9,0-ig lúgosítjuk, majd több részletben valamely szerves oldószerrel, mint például etilénkloriddal, kloroformmal, benzollal, előnyösen metilénkloriddal alkaloid negativitásig kivonatoljuk. A két fázist szétválasztjuk, majd a szerves fázisokat egyesítjük, szárítjuk, végül csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Ily módon amorf dimer alkaloid-bázis elegyet kapunk, amelyet valamely apoláros oldószerben, előnyösen benzolban feloldunk, majd az oldatot benzollal nedvesített alumíniumoxiddal töltött oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást benzol-kloroform 3:1 arányú elegyével végezzük. 100 ml-es frakciókat fogunk fel és az egyes frakciókban oldott dimer alkaloidokat vékonyréteg, illetve papírkromatográfiás vizsgálattal azonosítjuk. Az első frakciók a kísérő alkaloidok egy részét és a vinblasztint, a soronkövetkezők az N-dezmetil-vinblasztint, majd a következők a vinkrisztint tartalmazzák. Az N-dezmetil-vinblasztin tartalmú frakciókat egyesítjük, majd kíméletes módon, célszerűen csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A nyers N-dezmetil-vinblasztint ezután valamely poláros oldószerben, mint például acetonban, etanol:éter 4:1 arányú elegyében, előnyösen etanolban oldjuk, majd 1% kénsavat tartalmazó etanollal N-dezmetil-vinblasztin-szulfáttá alakítjuk. Az oldatot állni hagyjuk, miközben a termék kikristályosodik. A kapott sóból az N-dezmetil-vinblasztin-bázist felszabadítjuk. Az N-dezmetil-vinblasztin-bázis fizikai adatai az alábbiak: Op.: 210-215 C°(Boetius) [a] p° = 15,8° (c = 1, kloroform) Az N-dezmetil-vinblasztin-szulfát UV abszorpciós spektruma: x e 211 46,504 258 11,300 286 10,740 294 9,965 310 4,995 Az N-dezmetil-vinblasztin IR sprektumára jellemző hullámhosszok cm"1 mértékegységben kifejezve: 3560 1368 3440 1328 3000 1294 2956 1252 2940 1235 2930 1195 2870 1164 2830 1140 2785 1126 1740 1112 1620 1075 1597 1060 1495 1035 6 1487 1006 1455 998 1430 975 1416 954 5 1390 915 Az N-dezmetil-vinblasztint alumíniomoxid G rétegen kloroform-metanol 99,5:0,5 arányú eleggyel fejlesztve, 1%-os cériumammóniumszulfátot tartalmazó 10 tömény foszforsawal porlasztás útján előhíva, Rf = =0,60-nál megjelenő, előbb narancs színű, majd lilába átmenő folt jellemzi. A találmány szerinti eljárás előnye az eddig ismert eljárásokkal szemben az, hogy a Vinca rosea L.-ben 15 előforduló, natív N-dezmetil-vinblasztint, amelyet nekünk sikerült első ízben a növényi anyagban felismerni és abból kinyerni, közvetlenül vinkrisztinné alakíthatjuk át. A találmányunk szerinti eljárás haladó voltát a 20 3,205.220 számú amerikai egyesült államokbeli és a 160.967 számú magyar szabadalmi leírásban ismertetett módszerekkel szemben az alábbi táblázat szemlélteti (a táblázatban szereplő adatok azonos minőségi drogból nyerhető vinkrisztin-szulfát mennyiségeit 25 tünteti fel): vinkrisztin-szulfát mg/kg drog 30 3,205.220 amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 4 160.967 számú magyar szabadalmi leírás 6,5 a találmány szerinti eljárás 10,8 35 A találmány szerinti eljárás kivitelét közelebbről az alábbi példák szemléltetik: 1. példa 40 3,85 g nyers alkaloid szulfát-elegyet, amelyet a 160.967 számú magyar szabadalmi leírás 1. példája szerint nyertünk, 35 ml 98%-os hangyasav és 5,75 ml ecetsavanhidrid elegyében feloldunk és 5 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután az oldatot 150 45 ml 0-5 C° hőmérsékletű vízbe öntjük, majd hűtés mellett ugyancsak hűtött, töményvizes ammóniumhidroxid oldattal 8,5-9,0 pH-értékig meglúgosítjuk, és 300 ml metilénkloriddal több részletben alkaloid negativitásig kivonatoljuk. Az egyesített és vízmente-50 sített metilénkloridos oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 3,1 g drapp színű amorf dimer alkaloid bázis-elegyet nyerünk, amelyben az eredetileg jelenlevő N-dezmetil-vinblasztin formileződése révén már vinkrisztin alakjában van jelen. Az elegyet 55 etanolban oldjuk, és 1% kénsavat tartalmazó etanol hozzáadása útján a dimer alkaloid-szulfát addíciós só-elegyet leválasztjuk, 2,46 g kristályos dimer alkaloid-szulfát addíciós só-elegyet kapunk. A kristályos dimer alkaloid-szulfát-elegyet 20 ml 60 metilénklorid-kloroform 2:1 arányú elegyében felold-3
