164903. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására 1-hidroxi- benztriazol- származékok jelenlétében
17 164903 18 b) Diciklohexil-karbodiimid és 2 mólekvivalens N-hidroxi-szukcinimld adalékanyag jelenlétében Az V. 5. a) példában leirt eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy 1-hidroxi-benztriazol helyett 2,3 g (20 mmól) N-hidroxi-szukcinimidet alkalmazunk. 3,1 g (65,5%) olajos konzisztenciájú Z-Pro-Pro-Ala-OB^-t kapunk. A katalitikus hidrogénezés után 1,8 g (a Z-Pro-Pro-OH-ra számitva 47,8%) H-Pro-Pro-Ala-OBut-t különitünk el. A termék vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat, alapjánninhidrin-negativ szennyezésnyomokat tartalmaz. c) A Z-Pro-Pro-OBT elkülönítése nélkül 3,4 g (10,0 mmól) Z-Pro-Pro-OH és 1,5 g (11 mmól) 1-hidroxi-benztriazol 30 ml abszolút DMF-dal készitett oldatához 0 C°-on 2,2 g DCC hideg DMF-dal készitett oldatát adjuk. Az elegyet 1 órán át 0 C°-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 1,82 g (10 mmól) H.Ala-OBu*. .HCl-ot és 1,28 ml (10 mmól) N-etilmorfolint adunk hozzá. Az elegyet 1 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd az V. 5. a) példában leirt módon feldolgozzuk. 4,45 g olajos konzisztenciájú Z-Pro-Pro-Ala-OBu^t kapunk, hozam: 94,1%. A katalitikus hidrogénezés után 3,12 g (a Z-Pro-Pro-OH-ra számitva83%)H-Pro-Pro-Ala-OBu1 . .HCl-ot kapunk, op.: 145-150 C°. A termék kromatográfiásan egységes. 6. Z Val Pro-Pro-Ala-OBu1 -4,6 g (18,3 mmól) Z-Val-OH és 2,75 g (20,4 mmól) 1-hidroxi-benztriazol 45 ml abszolút tetrahidrofuránnal készitett oldatához 0 C°-on 4,05 g DCC hideg tetrahidrofuránnal készitett oldatát adjuk. Az elegyet 1 órán át 0 C°-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, és keverés közben 5,8 g (15,5 mmól) H-Pro-Pro-Ala-OBu1. .HCl-ot és 1,98 ml (15,5 mmól) N-etil-morfolint adunk hozzá. Az elegyet 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, a csapadékot kiszűrjük, a szürletet bepároljuk, és a maradékot az V. 5. a) példában leirt módon feldolgozzuk. 8,4 g (95%) olajos terméket kapunk. 7. Z-Phe-Phe-Val-Pro-Pro-Ala-OBu* 8,4 g (14,67 mmól) Z-Val-Pro-Pro-Ala-OBu^t metanolban, palládium-katalizátorjelenlétében hidrogénezünk. Az elegyhez automata titrálóberendezésből 1 n metanolos sősavoldatot adunk, és igy az elegy pH-ját 5 értéken tartjuk. A reakció befejeződésekor a katalizátort kiszűrjük, a szürletet bepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük. Az étert dekantálással elkülönítjük, és az olajos maradékot finom vákuumban száritjuk. 6,8 g (14,3 mmól, 97,6%) amorf H-Val-Pro-Pro-Ala-OBu'-.HCl kapunk. A kapott terméket, 6,45 g (14,4 mmól) Z-Phe-Phe-OH-ot, 3,85 g (28,5 mmől) 1-hidroxi-benztriazolt és 1,83 ml (14,3 mmől) N-etil-morfolint 500 ml abszolút DMF-ban oldunk. Az oldathoz 0 C°-on 3,15 g DCC abszolút DMF-dal készitett, hideg oldatát adjuk, az elegyet 2 órán át 0 C°-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, a csapadékot kiszűrjük, a szürletet bepároljuk, a maradékot etilacetátban felvesszük, az oldatot az V.5.a) példában leirt módon mossuk, nátriumszulfát fölött száritjuk, bepároljuk, és a maradékot petroléterrel eldörzsöljük. 11,2 g (a Z-Val-Pro-Pro-Ala-OBu -ra számitva 88%) terméket kapunk. A terméket tetrahidrofuránban, bázikus aluminiumoxidon (Woelm, I. aktivitási fok) kromatografáljuk. 9,05 g (a Z-Val-Pro-Pro-Ala-OBut -ra számitva 71,1%) tisztított terméket kapunk. A termék olvadáspontja nem éles (op.: 110-145 C°, joCj^-1260 (c = 2, metanolban). A termék kromatográfiásan egységes. 1-hidroxi-benztriazol helyett 2 ekvivalens N-hidroxi-szukcinimidet alkalmazva 78% nyers Z-Phe-Phe-Val-Pro-Pro-Ala-OBu'-ot különitünk el. A nyers termék aluminiumoxidos kromatografálása után csak az eredeti mennyiség körülbelül 75%-ának megfelelő mennyiségű tisztított terméket kapunk. [Ö^]D2= " 126 ° ( C = 2 > metanolban). 8. H-Phe-Phe-Val-Pro-Pro-Ala-OBu* 8,9 g Z-Phe-Phe-Pro-Pro-Val-Pro-Pro-Ala-OBu 1 metanolos oldatát palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük, és az elegy pH-ját automata titrálóberendezésből adagolt 1 n metanolos sósavoldattal 5 értéken tartjuk. A hidrogénezés befejeződése után a katalizátort kiszűrjük, és a szürletet vákuumban bepároljuk. A maradékot vizben felvesszük, az oldhatatlan anyagot kiszűrjük, az oldatot nátriumkarbonát-oldattal pH = 9 értékre lugositjuk, és a kivált olajat etilacetáttal háromszor extraháljuk. Az egyesitett etilacetátos oldatokat nátriumszulfát fölött száritjuk és bepároljuk. 7,3 g (97,4%) amorf terméket kapunk. A termék kromatográfiásan egységes. 9. Z-Phe-Phe-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Pro-Pro-Ala-OBu* a) Diciklohexilkarbodiimid és 2 mőlekvivalens 1-hidroxi-benztriazol adalékanyag jelenlétében 8,1 g (11 mmól) Z-Phe-Phe-Pro-Pro-OH.CHA-t etilacetát és 2 n sósavoldat között megosztunk. Az etilacetátos fázist vizzel mossuk, nátriumszulfát fölött száritjuk és bepároljuk. A maradékot 40 ml DMF-ban oldjuk, és az oldathoz 7,3 g (10 mmól) H-Phe-Phe-Val-Pro-Pro-Ala-OBu'-t és 2,7 g (20 mmól) 1-hidroxi-benztriazolt adunk. Az elegyet -10 C°-ra hűtjük, 2,2 g DCC hideg DMF-dal készitett oldatát adjuk hozzá, 4 órán át alacsony hőmérsékleten, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, és másnap bepároljuk. A maradékot etilacetátban felvesszük és az V.5.a) példában leirt módon mossuk. A maradékot tetrahidrofuránban oldjuk és bázikus aluminiumoxid-oszlopon kromatografáljuk. Az eluátumot bepároljuk és finom vákuumban száritjuk. Amorf, vékonyrétegkromatográfiásán egységes terméket kapunk. Hozam: 12,4 g (91,4%). 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 9
