164903. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására 1-hidroxi- benztriazol- származékok jelenlétében
15 164903 16 V. példa Antamanid-szekvenciáju védett dekapeptid (Z-Phe-Phe-Pro-Pro-Phe-Phe-Val-Pro-Pro-Ala-OBu*) szintézise 5 1. Z-Pro-Pro-OH (M = 346) 370 g (1 mól) Z-Pro-ONP és 127 g (1,1 mól) prolin elegyét 140 ml (1 mól) trietilamin jelenlé- 10 tében 4 órán át etanolban forraljuk. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot 1,5 1 vizben felvesszük, és 2x250 ml éterrel extraháljuk. A vizes fázist féltömény sósavoldattal pH = 2 értékre savanyitjuk, és a kivált kristályos csapadékot ke- 15 vés etanolből átkristályositjuk. 256 g (74%) terméket kapunk, op.: 188-189 C°, [ÖCJg3 = -101° (c= =2 50%-os DMF-ban). 2. H-Pro-Pro-OH (M = 212) 60 g (0,173 mól) Z-Pro-Pro-OH-t 500 ml ou7o os metanolban palládium jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, és az oldószert vákuumban lepároljuk. A maradékot acetonnal eldörzsöljük, szűrjük, és a csapadékot éterrel mossuk. 35,2 g (96%) terméket kapunk, [CÍ -]Q°= -160° (c= = 2, vizben). 20 25 30 Az elegyhez 8,1 g (70 mmól)N-etilmorfolint adunk, és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot 200 ml etilacetátban felvesszük, 1 n sósavoldattal és kevés vizzel mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk, és az etilacetátot lepároljuk. A maradékot kevés acetonban felvesszük, és az oldathoz 8,5 ml ciklohexilamint és 300 ml étert adunk. A kivált csapadékot néhány órás állás után 0 C°-on szűrjük, szárítjuk, és izopropanolból átkristályositjuk, 29,0 g (64,8%) terméket kapunk, op.:194-196C°,[cC]20= = -101° (c = 0,3, metanolban). Elemzés a C42 H 52 N 5 0 7 képlet (M =739,8) alapján): számitott %: C = 68,2, H = 7,08, N = 9,47; C = 68,2, H = 7,2, N = 9,6. talált %: A savat a következőképpen szabadítjuk fel: a terméket etilacetátban felvesszük, 2x50 ml 1 n sósavoldattal kirázzuk, kevés vizzel mossuk, nátriumszulfát fölött száritjuk, és az etilacetátot vákuumban lepároljuk. A hozam közel kvantitativ. 5. H-Pro-Pro-Ala-OBu\HCl szintézise 3. Z-Phe-Phe-OH (M = 446) 66 g (0,4 mól) fenilalanint 800 ml dioxán és 200 ml 2 n nátriumhidroxid-oldat elegyében oldunk. Az elegyhez 79,2 g (0,2 mól) Z-Phe-OSu-t adunk, és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált fenilalanint szűréssel eltávolítjuk. A szürletet vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot 400 ml etilacetátban felvesszük, 2 n sősavoldattal és vizzel mossuk, az etilacetátos fázist nátriumszulfát fölött száritjuk, és az oldószert lepároljuk. A maradékot 3:1 arányú etanol: viz elegyből átkristályositjuk. 69,0 g (77,4%) terméket kapunk, op.: 158-160 C°, mólsuly: számitott: 446, mért (titrálással): 445. 4. Z-Phe-Phe-Pro-Pro-OH 44,6 g (0,1 mől)Z-Phe-Phe-Oíri, 23 g (0,2 mól) HOSu és 22 g (0,107 mól) DCC 400 ml THF-nal készített oldatából -5 C°-on szokásos módon hidroxlszukcinimidésztert állítunk elő. Az elegyet a DCC hozzáadása után 1 órán át -5 C°-on, majd 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük, a 2,3 g karbamidot kiszűrjük, és a szürletből az oldószert vákuumban lepároljuk. A maradékot etanolből átkristályositjuk. 42,5 g (78,2%) terméket kapunk, op.: 148-151 C°, [j*-]^ = -30,9° (c = 1, DMA-ban). 37,8 g (70 mmól) fenti módon kapott hidroxi-szukcinimidészter, 15,4 g (73,5 mmól) H-Pro-Pro-OH és 150 ml DMF elegyét keverjük. 45 perc elteltével a H-Pro-Pro-OH teljesen feloldódik. a) Diciklohexil-karbodiimid és 2 mólekvivalens 1 -hidroxi-benztriazol jelenlétében 35 3,46 g (10 mmól) Z-Pro-Pro-OH, 1,82 g (10 mmól) H-Ala-OBu'.HCl, 2,7 g (20 mmól) 1-hidroxi-benztriazol és 1,28 ml (10 mmól) N-etilmorfolin 30 ml abszolút DMF-dal készített oldatához 40 0 C°-on 2,2 g DCC abszolút DMF-dal készített, hideg oldatát adjuk. Az elegyet 2 órán át 0 C°-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, a csapadékot kiszűrjük, a szürletet bepároljuk, és a maradékot etilacetát és víz között megosztjuk. 45 Az etilacetátos fázist telitett nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, 2 n citromsav-oldattal, telitett nátriumhidrogénkarbonát-oldattal majd vizzel mossuk, nátriumszulfát fölött száritjuk és bepároljuk. A maradékot körülbelül 20 g bázikus alaminium-50 oxidon (Woelm, I. aktivitási fok)etilacetátbankromatografáljuk. Az eluátumot bepároljuk. 4,0 g (84, 5%) olajos konzisztenciájú Z-Pro-Pro-Ala-OBu'-t kapunk. Az olajos konzisztenciájú Z-Pro-Pro-Ala-OBu^t 55 metanolban palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Az elegy pH-ját automata titrálóberendezésből adagolt 1 n metanolos sósavoldattal 5 értéken tartjuk. A reakció befejeződésekor -azaz amikor az elegy már nem fogyaszt több me-60 tanolos sósavoldatot - a katalizátort kiszűrjük, a szürletet bepároljuk és éterrel eldörzsöljük a maradékot. 2,75 g (73,2% a Z-Pro-Pro-OH-ra szí mitva) terméket kapunk, op.: 147-151 C°, \^% za-22_ = -152 (c = 2, metanolban). A termék kroma-65 tográfiásan egységes.
