164903. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására 1-hidroxi- benztriazol- származékok jelenlétében

3 164903 4 dett peptidet, amelynek reakcióba lépő karboxilcsoportja szabad, adott esetben védett aminosav-, illetve peptidészterrel vagy -amiddal, amelynek reakcióba lépő a minő-csoportja szabad, a pepiidkémiában használatos oldószerben reagáltatunk karbodiimid jelenlétében, és adott esetben a védőcsoportok egy részét vagy valamennyi védőcsoportot lehasítjuk, A találmány érdekében ugy járunk el, hogy a) 1-2 mólekvivalens (I) általános képletü 1--hidroxi-benztriazol-származék - ahol R jelentése halogénatom, trifluormetil-, nitro-, rövidszénláncu alkil-, metoxi-, illetőleg etoxi-csoport, amikor n jelentése 1-től 4-ig terjedő egész szám, vagy R jelentése hidrogénatom, karboxamid-, ciano-, szubsztituálatlan szulfonsavamid-csoport, vagy rövidszénláncu alkil-csoportokkal szubsztituált amidcsoporttal rendelkező szulfonsavamid-csoport,amikor n jelentése 1 - jelenlétében reagáltatunk, vagy b) 1-2 mólekvivalens (1) általános képletü 1-- hid roxi-benztriazol- származékot - ahol R és n jelentése a fenti - az aminosav- vagy peptid-komponens szabad karboxil-csoportjával és valamely karbodiimid-vegyUlettel aktivált származékká alakitunk, majd a kapott aktivált származékot szabad amino-csoporttal rendelkező aminosav- vagy Peptid-komponens sei - amelynek karboxil-csoportja is lehet - reagáltatjuk. Amennyiben az (I) általános képletü vegyületekben n értéke I-nél nagyobb, az R csoportok különböző szubsztituenseket is jelenthetnek. Az I általános képletü vegyületek közé tartozó 1 -hidroxi-6-nitro-benztriazol (R=nitro-csoport)előállítását Th. Curtius és N. Mayer irta le n.prakt. Chem. (2) 76, 374 (1907)], mig az 1 általános képletü vegyületek közé tartozó l-hidroxi-6-szulfonamido-benzotriazol (R=szulfonamid-csoport) előállítását a 2 410 619 sz. USA-beli szabadalmi leírás [c.A. 4L 1245Í (1947)] ismerteti. A nitrogénatomon védőcsoportot hordozó aminosavak és peptidek 1-hidroxi-benztriazolokkal és diciklohexil-karbodiimiddel aktiv származékokat képeznek, amelyek a peptidszintézisben előnyösen használhatók fel. Ebben az esetben aktivált észterek képződnek, amelyek az oldatban aktivált amidokkal vannak egyensúlyban. Az anyag természetétől függően az aktivált észtereket vagy az aktivált amidokat el is különithetjük, az aktivált termékek elkülönítésére azonban rendszerint nincs szükség. A találmány szerinti eljárást az A. reakcióegyenlet irja le. A reakcióegyenletben R COOH a nitrogénatomon védőcsoportot hordozó aminosavakat ill. peptideket jelent. Az uj aktivált vegyületek rendkívül gyorsan reagálnak primer és szekunder aminokkal. Ha a Z-Phe-Val-OCHß-at 1 mólekvivalens N-etilmorfolin jelenlétében Z-Phe-OBT és H. Val-OCH3. HCl reakciójával állítjuk elő, 0 C°-on 5 perc alatt a peptid 90%-nál nagyobb mennyiségben képződik (lásd 1. ábra o-jelü görbéje és IV. 4. példa). N-hidroxi-szukcinimidészter adalékanyag jelenlétében (xjelü görbe) a fenti hozam csak 2 óra elteltével érhető el (ugyancsak 0 C°-os hőmérsékleten). Továb- . bi előnyt jelent, hogy az észtert nem kell elkülöníteni, ugyanis az N-hidroxi-szukcinimiddel ellentétben az 1-hidroxibenztriazol és származékai nem képeznek diciklohexilkarbodiimiddel melléktermékeket. Ezt Igen könnyen igazolhatjuk például a Chem. Ber. 97 1207 (1964) szakcikkben ismertetett, szabad cC-aminocsoportot tartalmazó, részben védett kortikotropin-(ll-23)-tridekapeptid-amidra vonatkozó papirkromatográfiás vizsgálattal. Ha a fenti vegyületet dimetilf or mamidban vagy hasonló oldószerben diciklohexil-karbodiimid és hidroxi-szukcinimid jelenlétében állitjuk elő, a kivánt termék néhány óra elteltével papirkromatográfiás utón már nem mutatható ki, hanem egyéb vegyületekké alakul. A diciklohexil-karbodiimid és 1-hidroxi-benztriazol jelenlétében végzett szintézis során a tridekapeptid még 15 óra elteltével is változatlan marad. A karboxil-terminális aminosavként prolintői és glicintől eltérő vegyületeket tartalmazó, a nitrogénatomon védett peptidek aktiválásakor kis mennyiségű racemizálódással kell számolnunk, ezek a vegyületek azonban az N-hidroxi-szukcinimidészterek és diciklohexilkarbodiimid jelenlétében végzett szintézissel sem állíthatók elő racémmentesen (lásd 2. táblázat, 1.2.példa). Az 1-hidroxi-benztriazolon kivül a következő vegyületeket használhatjuk fel: 6-klór-l-hidroxi-5-izopropil-benztriazol, 5-klór-l-hidroxi-7-metil-6-nitro-benztriazol, továbbá a példákban felsorolt vegyületek. Karbodiimid-vegyületként a peptidkémiában szokásos anyagokat, például N, N'-diciklohexil-karbodiimidet, N, N* -diizopropil-karbodiimidet és egyéb, vizben oldódó karbodiimid-vegyületeket alkalmazhatunk. Az aminosavak és peptidek reakcióképes csoportjainak védelmére a peptidkémiában szokásos védőcsoportokat használhatjuk fel. Védőcsoportként polimer gyantákat, például hidroximetilpolisztirolt is alkalmazhatunk (E. Schröder, K. Lübke: The Peptides, I. kötet, Academic Press, New York és London 1965, 108-111. oldal). A találmány szerinti eljárásban felhasznált, és az irodalomban még nem ismertetett, magban helyettesitett 1 -hidroxi-benztriazolokat önmagában ismert módon állithatjuk elő ugy, hogy a (II) általános képletü o-klór-nitrobenzolokat - ahol R és n jelentése a fent megadott - 3 mólekvivalens hidrazinhidrát vagy 1 ekvivalens hidrazinhidrát és 2 mólekvivalens trietilamin jelenlétében, alkoholban melegítjük, az 1-hidroxi-benztriazol-vegyUlet hidrazin- illetve trietilaminsóját vizben oldjuk, és az oldatot megsavanyitjuk - ekkor a magban helyettesitett 1-hidroxi-benztriazolok kiválnak. A találmány szerint előállított vegyületeket a gyógyászatban alkalmazhatjuk, vagy egyéb, gyógyászatilag értékes peptidek, például Oxitocin, vasopressin, glükagon, ACTH, szekretin, tireokalcltonin vagy inzulin előállításához használhatjuk fel. Oldószerként például a következő, a peptidkémiában szokásos anyagokat használhatjuk fel: dimetilformamid, dimetilacetamid, tetrahidrofurán, dioxán, piridin, dimetilszulfoxid vagy metllénklorid. A reakciót előnyösen-20 C° és +40 C° közötti hőmérsékleten, célszerűen körülbelül 0 C°-on hajtjuk végre. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2