164816. lajstromszámú szabadalom • Eljárás anyarozs-alkaloidok, főként ergokriptin és ergokornin fermentációs előállítására

164816 5 6 va. mennyiségüket azonos standardra vonatkoztatva UV abszorpció alapján határoztuk meg. A leltunietett alkaloidérték, a komponensek egyenkénti értékének összege. A törzs megoszlása: által termelt alkaloidfajták jellemző ergokriptinin crgokorninin ergokriptin ergokornin ergozin ergometrinin ergometrin egyéb vízoldékony alkaloid 5% 4% 30% 28% 5% 4% 22% 2% A megadott részlete/és adatai alapján a 88/1972 számú C'Iaviceps purpurea törzs összefoglaló jellemzése : Mutagen kezelés nélkül előállított, szaprofita alkaloidtermelésre képes variáns. 0,1 1,0 '/• ammóniumnitrát jelenléte a táptalajban a torzs növekedését és alkaloidtermelését nem gátolja, sőt előnyösen befolyásolja. Alkaloidtermelő táptalajon nem észlelhető a (laviceps törzsekre jellemző: sou: Hu? pigment tcimelese. Az atkaioidten.ielcs a 6 7 napon tetőz. A képződő micélium mennyisége a 7 napig 3.5% alatt marad, így a fajlagos alkaloidtermelés sejt szárazanyagra vonatkoztatva eléri a 30 mg;g értéket. A termelt alkaloidok 60 70%-a a/ eigotoxm-csoport két komponense, illetve azok izomerjei, gyakorlatilag azonos arányban A találmány tárgya eljárás anyaro/s-alkaloidok. főként ergokriptin és eisjokomin előállítására Claviceps purpurea törzzsel szacharózt és szervetlen nitrogént, valamint egyéb önmagukban ismert adalékokat tartalmazó folyékony táptalajon történő levegőztetett feimenláció útján, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként az OKI 88; 1972 szám alatt letétbe helyezett Claviceps purpurea variánst alkalmazunk. \ tor/s. tulajdonságai miatt kedvezően alkalmazható ergokriptin és ergokornin előállítására. \ torzsét alkalmazó fermentációs eljárás, mely önmagukban ismert táptalajokon, önmagában ismert módon folytatható le, a korábbi ergotoxin fermentációs eljárásokhoz képest több szempontból előnyös. 1. A mutagen kezelés nélkül előállított torzs stabilitása nagyobb, mint a mutáns törzseké. így a torzsét alkalmazó eljárás jol reprodukálható. 2. A szerves nitrogénforrás elhagyása a táptalajból és helyette ammóniumnitrát alkalmazása ugyancsak javítja a reprodukálhatóságot és olcsóbbá teszi a táptalajt. 3. Az 5 7 napos fermentációs idő kedvező a korábban ismert 8 I 2 napos, peptid-típusu alkaloidokat termelő fermentációkhoz képest. 4. A csökkent pigmenttermelés és az alacsony micélium mennyiség alkalmasabbá teszi az előállított fermentlevet az alkaloidok kinyerésére. 5. Az előállított fermentleben kedvező a termelt alkaloidok megoszlása. Az ergotoxin-csoport három tagja közül kettő egyenlő mennyiségben keletkezik, ezeket együttesen kinyerve ergokrisztínnel egy azonos komponensarányu. komplett ergotoxin készítménnyé egészíthetek ki. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 56 60 65 70 6. A legjelentősebb mellékalkaloid, az ergometrin vízoldékonysága miatt a feldolgozás során egyszerűen elkülönül és külön kinyerhető. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi példák szemléltetik: /. példa Az OKI nál 88/1972 szám alatt deponált törzs egy tipikus 30 napos telepét az SC 101 jelzésű szilárd kultúra felületéről levesszük, majd 10 ml steril vízben homogenizáljuk, és a szuszpenzióval 500 ml-es L/rlenmeyer lombikban lévő 100 ml S2C jelzésű táptalajt oltunk. Az S2C jelzésű táptalaj összetétele az alábbi: szacharóz 200,0 g citromsav 15.0 g .káliumdihidrogénfoszfát 0,5 g magnéziumszulfát 0,3 g ammóniumhidroxid ad pH 5,2 víz ad 1000,0 ml A tenyészetet 24 C°-on 6 napig rázatjuk, majd 10 ml-t tovább oltunk 500 ml-es hrlenmeyer lombikban 100 ml SB 101 jelzésű táptalajra, melynek összetétele a következő: szacharóz borostyánkősav kálciurnnitrát ammóniumnitrát káliumdihidrogénfoszfát magneziumszulfát nátrimnklorid ammóniumhidroxid adpll 5.2 viz ad I 000.0 g 100.0 g 10.0 g 1.0 g 1.0 g 0,5 a 0,3 g 10.0 g napig A tenyésztést rá/óas/talon 24 (""-on folytatjuk. A tenyészet szara/anyagtartalma 3.42 '•;'. A 100 ml tenyészetet 50 ml kloroform ázopropanol 4.1 arányú elegyével extrahálunk, 10 ml-t bepárolva a maradékot 1 ml kloroform-metanol I :1 arányú elegyében felvesszük és s/áraz alumíniumoxid rétegen kromatogrataljuk. Az alkaloid tóitokat IV fényben jelöljük ki. \"i borkősavat tartalmazó 50'.''-os metanollal leoldiuk és I 'V abszorpció alap|án határozzuk meg a mennyiségét. A kapott alkaloid ei tekék összege 1687 gamma ml, ergokornin és ergokriptin 1 187 gamma,ml. A kapott tenyészetek bármelyikéből az ergokriptin és ergokornin ismert módon kristályos alakban kinyerhető. 2. példa Az 1. példa szerinti torzs és szilárd táptalaj alkalmazásával kb. 150 cm2

felületű összefüggő 30 napos miceliumréteget lekaparunk az agar felületéről. 100 ml vízben szuszpendáljjik és homogenizáljuk A szuszpenzió 20 20 ml-ével 750 ml-es hrlenmeyer lombikban 2-szer 200 ml S( 100 jelű táptalajt oltunk, melynek oss/etétele a következő: szacharóz 75 citiomsav 100.0 g 10.0 g 3