164659. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szulfito-korrinoidok előállítására
3 164659 4 ból az is, hogy az eljárás kivitelezéséhez sok oldószerre, valamint nagy térfogatok bepárlására van szükség. A 974.284 sz. angol szabadalmi leírás szerint úgy járnak el, hogy nagyobb mennyiségű alkáli-biszulfitot adnak ahhoz a vizes közeghez, melyben a B12 -vitamint feloldják, és alifás karbonsavval az oldatot megsavanyítják, majd a szulfito-származékot további származékká alakítják át. Az eddig ismertetett eljárások számos nehézséget rejtenek magukban, így közös jellemzőjük, hogy a cianokobalamint a vizes közegben legfeljebb az oldékonyság felső határáig, tehát 1,2%-os koncentrádóig tudják csak oldatban tartani, és ezért üzemi méretben igen nagy volumenek szükségesek a műveletek elvégzésére. További hátrányt jelent az is, hogy a cianokobolamin — mint neutrális kobalamin —igen stabil, ezért az alkálifém-szulfítokkal erősen savanyú, az alkil-szulfitokkal pedig erősen lúgos közegben kell a reakciót végrehajtani. Dyen extrém pH értékeknél a több órás enyhe melegítés hatására már maga a kobalaminmolekula is károsodik. Dezamidálódás révén B12 -vitamin-karbonsavak (anti-B 12 -vitamin) Ül. a nukleotidcsoport lehasadásával kobinamid (B faktor) keletkezik. Azt találtuk, hogy korrinoidokban a danidcsoport cseréjét előnyösen úgy végezhetjük el, ha a danokorrinoidokat fenolban, iü. származékaiban feloldjuk és a fenolos oldatot szulfit-ionokat tartalmazó, erősen savanyú kémhatású vizes oldattal, heterofázisban reagáltatjuk. Fenolszármazékként előnyösen krezolt, xilenolt, klórfenolt vagy triklórfenolt alkalmazhatunk. Ugyancsak fenolszármazékként alkalmazható a 160.370 lajstromszámú magyar szabadalmi leírásban ismertetett alacsony kondenzációs fokú fenol-formaldehid gyanta, mely a korrinoidokkal korrinoid-fenol-formaldehid gyantakomplexet képez. A fenolban vagy fenolszármazékban oldott, ill. a korrinoid-fenol-formaldehid gyantakomplexben levő ciano-korrinoidok a rekació folyamán a fenolos fázisban, Ül. a komplexben maradnak, a keletkező szulfito-korrinoidok mellett. Ily módon a ciano-korrinoidok a szerves fázisban mennyiségileg szulfito-korrinoidokká alakulnak át, és az eddig vizes közegben végrehajtott reakdót kisérő hátrányos hidrolízis nem játszódik le. A találmány tehát eljárás szulfito-korrinoidok előállítására ciano-korrinoidoknak kénessawal vagy sóival való reagáltatása útján, melyre jellemző, hogy a reakciót fenolban vagy valamely fenolszármazékban és/vagy azok elegyében, heterofázisban végezzük, majd a kapott szulfito-korrinoidokat a reakcióelegyből ismert módon kinyerjük. A találmány szerint oly módon járunk el, hogy valamely ciano-korrinoidot fenolban vagy valamely fenolszármazékban feloldunk, majd jégecettel savanyított alkálifém-biszulfit oldattal vagy kénessawal 40-70 C°-on reagáltatunk, utána levegőt vagy semleges gázt vezetünk a reakciókeveréken keresztül, majd a keletkezett szulfito-korrinoidot a szerves oldószeres fázisból ismert módon vizes fázisba visszük át és ebből aceton hozzáadásával kristályos szulfito-korrinoidot állítunk elő. A találmány szerint eljárhatunk oly módon is, hogy B! 2 -vitamint tartalmazó fermentléhez nát-5 ronlúgban oldott triklórfenolt és amorf kovasavat adunk, majd a savanyítás hatására képződött csapadékot, mely a B12 -vitamint mennyiségüeg tartalmazza, a fermentlétől elválasztjuk és vízben szuszperidálva keverés közben kéndioxid gázt 10 vezetünk hozzá. A keletkezett szulfito-kobalamint tartalmazó csapadékot vízzel mossuk, ezután a csapadékból a triklórfenolt acetonnal eltávolítjuk, majd a maradékból vízzel kioldjuk a szulfito-kobalamint és aceton hozzáadásával kikristályosítjuk. 15 A találmány szerinti eljárásnak megfelelően eljárhatunk úgy is, hogy a 160.370 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás szerint előállított B12 -vitamin-fenü-formaldehid gyantakomplexeket szuszpendálunk vízben és kéndioxid bevezetésével 20 szulfito-kobalamin-fenol-formaldehid gyantakomplexet kapunk, mely a 161.732 lajstromszámú magyar szabadalmi leírásban leírt bármelyik változat szerint kristályos szulfito-kobalaminná dolgozható fel. 25 A jelen szabadalmi bejelentés értelemszerűen vonatkozik azokra a korrinoidokra is, amelyek különféle nukleotidbázist tartalmaznak, ül. nukleotidmentes származékok. A találmány szerinti eljárás előnye az eddig 30 ismert eljárásokkal szemben az, hogy egyszerűen könnyen, kis térfogatban kivitelezhető, az eljárás térfogatigénye például az 1.225.188 sz. NSZK-beli szabadalmi leírásban ismertetett eljárás térfogatigényének mindössze 1/10-e, ami megfelelően 35 kisebb apparatura-igényt jelent. További előnyt jelent, hogy a heterofázisban végzett reakció következtében a felhasznált oldószermennyiség viszonylag kevés, például az 1.225.188 sz. NSZK-beli szabadalmi leírás szerinti eljárás oldó-40 szerigényének mindössze 15-20%-a. AZ eljárás reprodukálható, ezenkívül kristályos, humán gyógyászati célra megfelelő minőségű terméket lehet vele előállítani. Lehetőséget nyújt az eljárás továbbá arra is, 45 hogy fermentlevekből fenollal vagy fenolszármazékkal feldúsított Bj 2 -vitamin kivonatból szulfito-kobalamint állítsunk elő. Az eljárás további előnye, hogy a szulfito-kobalamin tömény vizes oldatából közvetlenül, 50 könnyen előállíthatjuk a kristályos nitrito-kobalamint (Bj 2 C-vitamint). A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módját és részleteit az alábbi példák szemléltetik: 1. példa: 12 g kristályos B12 -vitamint, melynek hatóanyagtartalma a British Pharmacopoeia 1968 60 „Cyanocobalamin" cikkelye (262 old.) szerinti kiértékelés alapján 92,00%, 60 ml elfolyósított, 10% víztartalmú fenolban feloldunk. Az oldást előnyösen 500 ml-es, három-furatú, keverővel ellátott, csiszolatos gömblombikban 65 végezzük. Ezután 240 ml kb. 60 C°-os vízben 24 2
