164659. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szulfito-korrinoidok előállítására
5 164659 6 g nátrium-biszulfitot oldunk fel, majd 24 ml jégecetet adunk hozzá, és az oldatot a gömblombikban levő fenolos oldathoz csepegtetjük. A lombik egyik csiszolatába üvegcsövet illesztünk úgy, hogy az összeszűkülő cső vége a lombik aljáig érjen, a másik csövön pedig gyenge vákuum-elszivatást biztosítunk. A keverés megindítása után a lombikot 50-60 Cs -os vízfürdőbe helyezzük, és fénytől védve 5-6 órán keresztül ilyen körülmények között tartjuk. A keverés befejezésével a reakciókeveréket szobahőmérsékletre lehűtjük, majd választótölcsérbe öntjük, a szulfito-kobalamint tartalmazó fenolos fázist elválasztjuk, és a visszamaradó vizes fázist 2x20 ml fenol-kloroform 1:1 térfogatarányú elegyével összerázzuk, majd két fázist elválasztjuk. Az egyesített szerves oldószeres fázishoz 250 ml kloroformot, 180 ml acetont és 60 ml desztillált vizet adunk, összerázzuk, az alsó szerves oldószeres fázist elválasztjuk és 40 ml desztillált vízzel újból összerázzuk. Az egyesített vizes kivonatokat 2 x 50 ml kloroformos átrázással mentesítjük a fenol nyomaitól. Ezután a tömény vizes oldat pH értékét ammónia oldattal 7,5-re állítjuk, zavarosodásíg acetont adunk az odathoz, majd az aceton-víz térfogatarányát a továbbiakban 8:1 ill. 10:l-re növeljük. Másnapig 5 C9-nál alacsonyabb hőmérsékleten tartjuk az acetonos oldatot. A kivált kristályokat zsugorított üvegszűrőn - továbbra is fénytől védve — szűrjük és utána megszárítjuk. Összesen 10,7 g kristályos szulfito-kobalamint kapunk. Hatóanyagtartalmi kiértékelését úgy végezzük el, hogy az analitikai pontossággal bemért szulfito-kobalamin kristályt 0,1% NaCN tartalmú, jégecettel pH 5—6 érték közé állított frissen desztillált vízben feloldjuk. Az oldatot két óráig sötét helyen tartjuk, majd a British Pharmacopoeia 1968 „Cyanocobalamin" c. cikkelye (262 old.) szerint, a Bi2-vitamin analógiája alapján spektrofotométerrel a hatóanyagtartalmát meghatározzuk. Specifikus extinkcióként 199 értékkel számolunk. A nedvességtartalom figyelembevételével a kapott kristály tisztasága 95,8%. 2. példa: Az 1. példa szerint járunk el azzal a különbséggel, hogy a kristályos B12 -vitamint trikrezolban oldjuk fel és a krezolos fázis elválasztása után a vizes fázist 1:1 térfogatarányú krezol-kloroform elegyével rázzuk össze. 10,3 g kristályos szulfito-kobalamint kapunk, amelynek tisztasága 96,0%. 3. példa: 12 g kristályos B12 -vitamin faktor III.-at (5-hidroxi-benzimidazolil-cianokobamid), melynek hatóanyagtartalma a British Pharmacopoeia 1968 „Cyanocobalamin" cikkelye (262 old.) szerint a Bi 2 -vitamin analógiája alapján meghatározva 92,3%, 60 ml xilenolban feloldunk, majd 240 ml vizet öntünk hozzá. Az oldást előnyösen 500 ml-es háromfuratú, keverővel ellátott csiszolatos 5 gömblombikban végezzük. A lombik egyik csiszolatába üvegcsövet illesztünk úgy, hogy az összeszűkülő cső vége a lombik aljáig érjen. Ezen gyenge áramban (1 térf./ térf./perc) kéndioxid gázt áramoltatunk a rendszerbe, a lombik 10 harmadik csiszolatán keresztül pedig a gáz elvezetéséről gondoskodunk. A keverés megindítása után kezdjük el a gáz bevezetését, majd a lombikot 50 CG -os vízfürdőbe helyezzük. Fénytől védve, 1/2 órán át végezzük a kéndioxid gáz 15 bevezetését, utána a keverést tovább folytatjuk, és nitrogén gázt áramoltatunk 6—8 órán át a reakció-elegybe. Ezután a reakciókeveréket szobahőmérsékletre lehűtjük, a xilenolos fázist választótölcsérben elválasztjuk, majd a visszamaradó vizes 20 fázist 2 x 20 ml xilenol-kloroform 1:1 térfogatarányú elegyével összerázzuk, hogy a hatóanyag nyomait mennyiségileg eltávolítsuk. Az egyesített szerves oldószeres fázishoz 250 ml kloroformot, 180 ml acetont és 60 ml desztillált vizet adunk. 25 összerázás után az alsó szerves oldószeres fázist elválasztjuk és 40 ml desztillált vízzel újból összerázzuk. Az egyesített vizes kivonatokat 2 x 50 ml kloroformos átrázással mentesítjük a xilenol nyomaitól. 30 Ezután a tömény vizes oldat pH értékét ammónia oldattal 7,5-re állítjuk és zavarosodásíg acetont adunk az oldathoz, majd az aceton-víz térfogatarányát a továbbiakban 8:1 ill. 10:l-re növeljük. Másnapig 5 C°-nál alacsonyabb hőmér-35 sékleten tartjuk az acetonos oldatot. A kivált kristályokat zsugorított üvegszűrőn — továbbra is fénytől védve — szűrjük és utána megszárítjuk. 10,1 g kristályos 5-hidroxi-benzimidazolil-szulfitokobamidot kapunk. A nedvességtar-40 talom figyelembevételével a kapott kristály tisztasága 95,2%. 4. példa: 45 12 g megszárított és elporított, 65% hatóanyagot tartalmazó diciano-kobinamidot, melyet a Bi 2-vitamin üzemi feldolgozása során keletkezett diciano-kobinamid (B faktor) frakció sómentesítése 50 és beszárításából kaptunk, feloldunk 60 ml meta-krezolban, majd 240 ml vizet öntünk hozzá. Az oldást és a kéndioxid-, majd a nitrogén-gáz bevezetését a 3. példában leírtak szerint végezzük. Ezután a krezolos fázist választótölcsérben, elvá-55 lasztjuk, majd a visszamaradó vizes fázist 2x20 ml m-krezol-kloroform 1:1 térfogatarányú elegyével összerázzuk, hogy a színezék nyomait mennyiségileg eltávolítsuk. Az egyesített szerves oldószeres fázishoz 250 ml kloroformot, 180 ml 60 acetont és 60 ml desztillált vizet adunk, összerázás után az alsó szerves oldószeres fázist elválasztjuk és 40 ml desztillált vízzel újból összerázzuk. Az egyesített vizes kivonatokat 2 x 50 ml kloroformos átrázással mentesítjük az 65 m-krezol nyomaitól, majd a vizes oldat pH 3
