164658. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergometrin vagy savaddiciós sói kinyerésére és/vagy tisztítására
5 164658 6 kivonatból történő leválasztása és kívánt esetben az ergometrin-bázis felszabadítása útján, azzal jellemezve, hogy az ergometrint és adott esetben a fenti alkaloidokat, illetve sóikat tartalmazó szűrt fermentlevet, vagy a vizes oldatot az eredeti 5 térfogatra számított 0,5—0,1-szeres, előnyösen 0,5-0,3-szoros térfogat mennyiségű vízzel nem-, vagy korlátoltan elegyedő oldószerrel érintkeztetjük, miközben a vizes oldat szervetlen sókoncentrációját fokozatosan növeljük és az oldat pH 10 értékét valamely szervetlen bázis adagolásával 6-nál nagyobb, célszerűen 7—8 értéken tartjuk, a fázisokat elválasztjuk, majd s szerves fázisból híg vizes sav-oldattal, előnyösen 1%-os maleinsavoldattal, az ergometrint a vizes fázisba visszük, a vizes 15 fázist az eredeti térfogatra számított 0,05-0,01-szeres, előnyösen 0,03-0,02-szeres térfogat mennyiségű vízzel nem-, vagy vízzel korlátoltan elegyedő oldószerrel kivonatoljuk és az így kapott szerves fázisból az ergometrin savaddi- 20 ciós sóját, előnyösen maleátját leválasztjuk, kívánt esetben a savaddiciós sóból a bázist ismert módon felszabadítjuk. 25 A találmány értelmében úgy járunk el, hogy az ergometrint, vagy ergometrint és egyéb ergolinvázas alkaloidokat tartalmazó fermentlevet szűréssel megszabadítjuk az alkaloid-termelő Claviceps purpurea micéliumától. A szűrt ferment- 30 levet térfogatának tört részét kitevő mennyiségű vízzel nem-, vagy korlátoltan elegyedő oldószerrel, célszerűen metilizobutilketonnal, vagy kloroformmal keverjük és az oldat pH értékét valamely bázissal, mint pl. ammónium-, vagy alkálifém-hidr- 35 oxiddal, vagy -karbonáttal, vagy -hidrokarbonáttal, vagy -foszfáttal 6-nál nagyobb, célszerűen 7—8 értékre állítjuk be, miközben a vizes fázis sókoncentrációját valamely szervetlen só hozzáadásával, célszerűen ammóniumszulfáttal fokozatosan, 40 adott esetben telítésig növeljük, ügyelve arra, hogy a pH értéke 7-8 között maradjon. Szükség esetén a pH értékét a fent megadott bázisok valamelyikével korrigáljuk. 45 A keverést megszüntetve, a folyadék két fázisra különül. A felső oldószeres fázistól — amely az ergometrint és a többi oldott ergolinvázas alkaloidot tartalmazza- a koagulált fehérjéket és egyéb szennyezéseket, szükség esetén 50 szűréssel eltávolítjuk, ezután a szerves-oldószeres fázist térfogatára számított 1/3-1/20, célszerűen 1/10 térfogatrész híg savoldattal, előnyösen 1%-os maleinsav-oldattal érintkeztetve kivonatoljuk, amikor is az ergometrin ergometrin-maleát alakja- 55 ban szelektíven oldódik át a vizes fázisba. Az ergometrin-maleátot tartalmazó vizes fázisból az ergometrin jó hatásfokkal tovább töményíthető, ha a vizes oldatát térfogatára számított 1/2-1/3 térfogatrész vízzel nem-, vagy korlátoltan elegyedő 60 oldószerrel, pl. etilacetáttal vagy metüizobutilketonnal kivonatoljuk és az oldat kémhatását pH 6,0 fölött, célszerűen pH 7-8 értéken tartjuk, miközben a vizes oldat sókoncentrációját valamely szervetlen sóval, előnyösen ammóniumszulfáttal 65 fokozatosan, adott esetben telítésig növeljük, ügyelve arra, hogy az oldat pH értéke 7-8 között maradjon. A keverés megszüntetése után a rendszer két fázisra különül el, amelyeket elválasztunk, a felső oldószeres fázist szárítjuk, ezután az oldószeres fázisban jelenlevő ergometrint keverés közben egyenértékű maleinsav szerves oldószeres oldatának hozzáadásával ergometrinmaleáttá alakítjuk. A képződött ergometrin-maleát az oldatból kikristályosodik, a kristályokat szűrjük, majd kíméletesen szárítjuk, szükség esetén átkristályosítjuk. Találmányunk szerinti eljárás részleteit az alábbi példák szemléltetik: 1. példa 100 liter Claviceps purpurea 6 napos tenyészetből, amelynek ergometrin-tartalma 200 Mg/ml, egyéb ergolinvázas alkaloid-tartalma (ergokriptin, ergokornin) 180 ßglni, a micéliumot kiszűrjük, 90 liter szűrt fermentlevet kapunk, amelyhez 18 liter metilizobutilketont adagolunk. A fermentlé pH értékét 10%-os ammóniumhidroxid-oldattal 7—8-ra állítjuk. Majd erőteljes keverés közben kg-os részletekben 63 kg szilárd ammóniumszulfátot adunk hozzá, miközben ügyelünk arra, hogy az oldat pH értéke 7—8 között maradjon. Szükség esetén további 10%-os ammóniumhidroxid-oldat adagolásával a pH értékét korrigáljuk. Az ammóniumszulfát feloldása után a keverést leállítjuk, a fázisokat szétválni hagyjuk. Szükség esetén az emulziót szűréssel megszüntetjük. A metilizobutilketonos extraktumból először 1 liter, majd 0,5 liter l%os maleinsav-oldattal, végül kétszer 0,5 liter vízzel az ergometrint kivonatoljuk. A vizes oldatokat egyesítjük, majd 2 liter metilizobutilketont adunk hozzá és a pH értékét 10%-os ammóniumhidroxid-oldattal 7—8-ra állítjuk, majd intenzív keverés mellett kisebb részletekben összesen 1,75 kg szilárd ammóniumszulfátot adagolunk a rendszerhez, ügyelve arra, hogy az oldat pH-ja a megadott értéken maradjon, szükség esetén további ammóniumhidroxid-oldat adagolásával a pH értékét korrigáljuk. Ezután a keverést megszüntetjük, a két fázist szétválni hagyjuk, majd a metilizobutilketonos fázist szárítjuk. A szerves fázishoz, amely az ergometrint tartalmazza, metilizobutilketonos oldatban 7,5 g maleinsavat adagolunk. Az ergometrin-maleát kikristályosodik, amelyet leszűrünk, majd megszárítjuk. A fermentleben eredetileg jelenlevő ergometrin 83%-át 96%-os tisztaságban nyerjük ki. Op.: 188-189° (bomlásközben), [a]%0: • 53 (C = 0,5 víz). A kitermelés fokozható, ha a fermentlé első metilizobutilketonnal végzett kivonatolását friss metüizobutilketonnal megismételjük és az így kapott második kivonatot használjuk fel a következő friss fermentlé első extrakciójánál. 3
