164346. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált pirido [3,2-d]-pirimidinek előállítására

5 164346 6 Duke módszerével [J. Amer. Med. Assoc. 15, 1185 (1910)] határoztuk meg. A keringési rendszer vizsgálatát altatott macskákon vagy kutyákon végeztük [Eckenhoff, Amer. J. Physiol. 148, 582 (1947)]. Például a következő vegyületek trombocita-aggregációt gátló hatását Morris módszerével, és a vérzési időt meghosszabbító hatását Duke módszerével határoztuk meg. A = 2-piperazino-4-tiomorfolino-pirido[3,2--d]pirimidin-maleinát, B = 2-(N-metilpiperazino)-4-tiomorfolino-pirido[3,2-d]pirimidin-dihidroklorid, C = 2-piperazino-4-(l-oxidotiomorfolino)-pirido[ 3,2-d]pirimidin-dihidroklorid, D = 2-(N-metüpiperazino)-4-(l-oxidotiomorfolino)-pirido[3,2-d]pirimidin-dihidroklorid, E = 2-(dipropanolamino)-4-(l-oxidotiomorfolino)-pirido[3,2-d]pirimidin-hidroklorid, F = 2-(etanol-hexanolamino)-4-(l-oxidotiomorfolino)-pirido[3,2-d]pirimidin-hidroklorid, G = 2-piperazino-4-(l-oxido-2-metil-tiomorfolino)-pirido[3,2-d]pirimidin-dihidroklorid, H = 2-piperazino-4-morfolino-pirido[3,2-d]-pirimidin-dihidroklorid, I = 2-(N-metilpiperazino)-4-morfolino-pirido-[3,2-d]pirimidin-dihidroklorid, J = 2-dipropanolamino-4-morfolino-pirido-[3,2-dlpirimidin-dihidroklorid, K = 2-piperazino-4-piperidino-pirido[3,2-d]-pirimidin-dihidroklorid, L = 2-dipropanolamino-4-piperidino-pirido-[3,2-d]pirimidin-hidroklorid, M = 2-piperazino-4-( 1,1 -dioxidotiomorfolino)-pirido[3,2-d]pirimidin-dihidroklorid, N = 2-tiomorfolino-4-piperazino-pirido[3,2-d]-pirimidin-dihidroklorid, 0 = 2-(l-oxidotiomorfolino)-4-piperazino-pirido [3,2-d]pirirnidin-dihidroklorid, P = 2-piperazino-4-( 1 -oxidotiomorfolino)-6--metü-pirido[3,2-d]pirimidin-dihidroklorid és Q = 2-tiomorfolino-4-piperazino-6-metil--pirido[3,2-d]pirimidin-dihidroklorid. 10 15 gyöngyök nélküli kémcsövekkel szemben (4-6 kísérlet átlagértéke). (2) A vérzési idő meghatározására a vizsgálandó vegyületet nem altatott egereknek 10 mg/kg perorális adagban adtuk be. Egy óra múlva minden állat farkának végéről körülbelül 0,5 mm-t levágtunk, és a kiáramló vért 30 másodperces időközökben óvatosan szűrőpapírral felitattuk. Az így kapott vércseppek száma megadja a vérzési idő mértékét a kezeletlen állatokkal szemben (kísérletenként 5 állat). (3) Néhány vegyület akut toxicitását egereken (megfigyelési idő 14 nap) részben tájékozódás céljából, illetve az LD50

meghatározására az állatok százalékos arányából, amelyek a különböző nagyságú adagok hatására a megfigyelési időn belül elpusztultak, végeztük [J. Pharmacol. Exper. Therap. 96, 99 (1949)]. A következő táblázatban szemléltetjük a vizsgálati eredményeket: 25 30 35 40 45 (1)A trombocita-aggregációt gátló hatás meghatározására l-l ml emberi vért és 5 • 10"5 mól/liter végkoncentrációjú vizsgálandó anyagot kis 50 kémcsövekbe pipettázunk. A kémcsöveket 10 percig 37 C°-on inkubáljuk. A csövek felébe l-l g üveggyöngyöt teszünk („glass-beads for gas-chromatography" BDH cég, Poole, Nagy-Britannia). Ezután a lezárt kémcsöveket vízszintes 55 tengelyen forgó tárcsára erősítjük, és 1 percig forgatjuk. Ezáltal jó érintkezés jön létre az üveggyöngyök és a vér között. Ezután a kémcsövekben a vért további 1 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk, miközben a &Q vörös vértestek kielégítően leülepednek. A kapott plazmából elveszünk 0,01 ml-t, celloszkóp oldattal l:8000-re hígítjuk, és a lemezeket celloszkópban megszámoljuk. A vegyület hatására a tapadósság százalékos csökkenését határozzuk meg az üveg- 65 VegyüTapadósság Vérzési idő LD50 let csökkenése növekedése mg/kg p,o. %-ban %-ban A 99 171 413 B 53 118 — C 99 — 872 D 87 88 — E 88 40 — F 71 35 — G 96 55 — H 96 55 — I 70 40 — J 50 45 — K 39 138 — L 20 103 — M 88 98 250 (10 állatból 0 halt el) N 77 98 250 (10 állatból 0 halt el) O 98 35 250(10 állatból 0 halt el) P 89 98 — O 34 — — A következő példák közelebbről megvilágítják a találmány szerinti eljárást. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. A) példa: 2-Metiltio-4-tiomorfolino-pirido[3,2-d]pirimidin 1,3 g (0,0566 mól) nátriumnak 50 ml metanollal készült oldatába 3,1 g metiltiolt vezetünk. Ezután hozzáadunk 10 g (0,039 mól) 2-klór-4-tiomorfolino-pirido[3,2-d]pirimidint, és visszafolyatás közben 8 óra hosszat forraljuk. Lehűtés után vízzel hígítjuk, a reakcióterméket leszivatjuk, 3