164059. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás L-piroglutamil-L-hisztidil-L-prolin-amid előállítására
3 164059 4 zol eleggyel történő kezelés előtt katalitikus úton hidrogénezzük. A találmány szerinti eljárással előállított L-piroglutamil-L-hisztidil-proliamid további tisztítási műveletek nélkül kromatográfiás tisztaságú, TRF-aktivitása pedig nagy. Az LpiroglutamÜ-L-msztidü-L-prolinamid előállítására szolgáló találmány szerinti eljárás különösen előnyös, mivel az eljárás során minden esetben vízben nehezen oldható közbenső termékek keletkeznek, amelyek a vegyületek elkülönítését és tisztítását jelentősen megkönnyítik, i A találmány a) pont szerinti foganatosítási módjánál különösen nagy jelentőségű a (II) képlet szerinti L-hisztidil-L-prolin-4,4'-dimetoxi-benzhidrilamid közbenső termék. Ezt a vegyületet a jól tisztítható benziloxi-karbonil-L-hisztidil-L-prolin-4,4'-dimetoxi-benzhidrilamidból katalitikus hidrogénezéssel állíthatjuk elő. A (II) képletű vegyületet az (I) képletű L-glutamin-származékkal reagáltatva a (IV) általános képletű tripeptidet kapjuk. (R, R!, R2 = Mbh, vagy R, Rx = H, R2 = Mbh és Ac jelentése a fenti.) Különösen előnyös azoknak az (I) általános képletű származékoknak az alkalmazása, amelyekben R Mbh-csoportot ielent, mivel ezeknél az amid-csoportot a peptidkémiában használatos bármelyik módszerrel megvédhetjük anélkül, hogy az amidcsoport - az amidcsoporton védetlen glutamin-származékoknál szokásos módon - nitrilcsoporttá dehidratálódjék, vagy hogy a-amino-glutárimid keletkezzék. Az amidcsoport védelmére például az anhidritl- vagy inamirr-módszert vagy a Woodward-féle K-reagenst alkalmazhatjuk. Az Nabenziloxi-karbonil-N7-4,4'-dimetoxi-benzhidril-L-glutamint például a Proc. 9th Europ. Peptide Symp, c. közlemény (North Holland Publishing Comp., Amsterdam, 1968, 89. oldal) szerint úgy állíthatjuk elő, hogy benziloxi-karbonil-L-glutamint jégecetben, kénsav katalizátor jelenlétében 4,4.'-dimetoxi-benzhidrollal reagáltatunk. Ha az így kapott termékből a benziloxi-karbonil-csoportot hidrogenolitikus úton lehasítjuk és a reakcióterméket terc-butiloxi-karbonilaziddal, adamantiloxikarbonilkloriddal, vagy izoborniloxi-karbonilkloriddal reagáltatjuk, akkor további (I) általános képletű acil-származékokat állíthatunk elő (R = Mbh). Az (I) általános képletű vegyület (R = H és Ac jelentése a fenti) és az L-hisztidil-L-prolin-4,4'-dimetoxi-benzhidril-amid közti reakciónál — amely során olyan (IV) általános képletű vegyületet állítunk elő, amelyben R, = H, R2 = Mbh és Ac jelentése a fenti — az (I) képletű vegyületet előnyösen aktívált észter — például p-nitrofenil-észter - alakjában alkalmazzuk. A szóbanforgó reakció során Woodward-féle K-reagenst vagy diciklohexil-karbodiimidet is alkalmazhatunk 1-hidroxi-benzotriazol [Chem. Ber. 103. 788. (1970)] vagy 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-l,2,3-benzotriazin jelenlétében. A kapott (IV) általános képlet szerinti reakciótermékben — a fentiekhez hasonlóan — Rí jelentése hidrogénatom, R2 jelentése Mbh-csoport és Ac jelentése a fenti. Oldószerként célszerűen dimetilformamidot vagy dimetil-acetamidot alkalmazunk. A (IV) általános képletű vegyület előállítására szolgáló b) eljárásváltozatnál a (III) általános képletű terméket, melyben R,, R2 , Ac jelentése a következőkben definiált alkalmazzuk kiindulási 5 anyagként. A vízben szerves oldószerekben nehezen oldható Na-benzüoxi-karbonü-N7-4,4'dimetoxi-benzhidril-L-glutaminil-L-hisztidint a megfelelő metilészter elszappanosításával állítjuk elő. A (III) általános 10 képlet szerinti terméket L-prolinamiddal reagáltatva olyan (IV) képletű vegyületeket kapunk, amelyekben RÍ jelentése Mbh-csoport, R2 jelentése hidrogénatom. A fenti reakciót L-prolin-4,4'-dimetoxi-benzhidril-amiddal végezve a reakció során 15 keletkező (IV) általános képletű termékben Rt és R2 Mbh-csoportot jelentenek. A peptidkötést 1-hidroxi-benzotriazol, N-hidroxi-szukkcinimid vagy 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-1,2,3-benzotriazin jelenlétében diciklohexil-karbodiimid segítségével hozzuk 2o létre. A kondenzációs reakciókat előnyösen -10-0 C° hőmérsékleten kezdjük és szobahőmérsékleten fejezzük be. Oldószerként szintén dimetilformamidot és dimetilacetamidot alkalmazunk. A védőcsoportok lehasítása és a glutamil-csoport 25 egyidejű ciklizálása céljából a (IV) általános képletű vegyületeket 30-90 percig 10% anizolt vagy fenolt tartalmazó trifluorecetsavban forraljuk. A fenti idő elteltével az elegyet vákuumban szárazra pároljuk és a megkötött trifluorecetsav 30 eltávolítására anioncserélőn, így Amberlite IR-45, IRA-400 vagy Serdolit blau ioncserélő gyantán szűrjük. A szűrletet väküumbän Bépároljuk vagy liofilizáljuk. A találmány szerinti eljárás segítségével előállí-35 tott L-piroglutamil-L-hisztidil-L-prolinamid tiszta termék, amelyet a gyógyászatban a hipofízis működésének vizsgálatára és hipotireózis kezelésére alkalmaznak. 1. példa: L-Piroglutamil-L-hisztidil-L-prolin-amid előállítása a b) eljárásváltozat szerint 1. L-Piroglutamil-L-hisztidil-L-prolin-amid előállítása Z-Gln(Mbh)-His-Pro-NH2 -ből [(IV) általános képletű vegyület, R, = Mbh, R2 = H, Ac = Z = benziloxi-karbonil-csoport ]. a) Z-Gln(Mbh)-His-OMe 16,5 g Z-Gln(Mbh)-OH-t [(I) általános képletű 55 vegyület, R = Mbh],7,85 g H-His-OMe-2HCl-t, 8,8 g 1-hidroxi-benzotriazolt és 9,0 ml trietilamint 220 ml kloroformban oldunk. Az oldathoz 0 C°-on 12 ml kloroformban oldott 7,2 g diciklohexil-karbodiimidet adunk, majd az elegyet 3 órán keresztül 60 szobahőmérsékleten keverjük. Az elegyből a kloroformot - tekintet nélkül a csapadékra -desztillációval eltávolítjuk, majd a párlási maradékot 60 ml dimetilformamidban oldjuk. Az oldatlan diciklohexil-karbamidot szűréssel eltávolítjuk és a 65 szűrletet 400 ml vízbe öntjük. A kocsonyás 2
