164050. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a D-gyűrűben hidroxil- és keto-csoportot tartalmazó 13béta-rövidszénláncú alkil 3-metoxi-8,14-szeko-gona-1,3,5/10/9/11/-tetraének előállítására
7 164050 8 Nocardia sp. (MNG 67) burgonyás ferdeagar táptalajon kinőtt 10-napos tenyészetét 5ml 0,4%-os nátriumklorid-oldatban szuszpendáljuk és 3-literes Erlenmeyer-lombikban 11 táptalajt oltunk. A táptalaj összetétele: kukoricalekvár 15 g élesztőkivonat (nedves súly) 60 g dinátriumhidrogénfoszfát 4,5 g káliumdihidrogénfoszfát 3,4 g 1 l-re öntött csapvízzel. pH a sterilezés előtt 6,3. A beoltott tenyészetet 28°-on 48 órán át inkubáljuk malomszita rázógépen (percenként 300 fordulat, 2,5 cm kitérés). A kinőtt tenyészethez, miután a pH-t 7,8-ra állítottuk, 20 ml etanolban 0,4 g XIIa-t adagolunk. Az inkubálást azonos körülmények között 24 órán keresztül folytatjuk. A szubsztrátum átalakulását vékonyrétegkromátográfiával követjük. Kvantitatív átalakulás után a fermentációs folyadékot szűrjük, a szűrletet 2x300 ml metilizobutüketonnal kivonatoljuk. A sejtet 2x300 ml acetonban áztatjuk 12—12 óráig. Az acetonos oldatot kis térfogatra bepároljuk és vizes maradékot 2x60 ml metilizobutüketonnal kivonatoljuk. Az organikus kivonatokat egyesítés után vákuumban szárazra pároljuk, 100 ml acetonban 0,4 g semleges alumíniumoxiddal, majd 0,1 g szénnel derítjük és vákuumban szárazra pároljuk. Éterből 0,22 g 130-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(lO),9(ll)tetraén -14R0-ol-l7-on (Illa) nyerhető ki. Acetonból átkristályosítva op: 112-114 C°; (a)^s =+38° (c=l, dioxán): Amax =265 nm, e = 20 600. Elemanalízis C19 H 24 0 3 -ra (300,4) vonatkoztatva: számított: C 75,96% H 8,05%; talált: C 75,90% H 8,09%. 2. példa: A 13/3-e til-3- me toxi-8,14-sze ko-gon a-1,3,5( 10),9( 11 >te traén-14Rß-ol-17-on (Hlb) előállítása 6,0 g 13j3-etil-3-me toxi-8,14-sze ko-gon al,3,5(10),9(ll)-tetraén- 17S/3-ol-14-ont (IIb) az 1. példa szerint, azonban 4 órán keresztül redukálunk. A száraz maradékot acetonból kristályosítva 2,4 g 13ß-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-1,3,5(10),9(11> tetraén-14R/3,17S0-diolt (Xllb) kapunk. Metanolból átkristályosítva op: 159-162 C°: (a)D =0°; Xpiax =265 nm, e=20 600. Elemanalízis C20 H 28 0 3 -ra (316,4) vonatkoztatva: számított: C 75,91% H 8,91%; talált: C 75,94% H 8,97%. Az anyalúg komponensei az 1. példa szerint, preparatív rétegkromatográfiás úton választhatók szét. Az apolárisabb anyagot hordozó adszorbensről még 0,4 g XJIb, a polárisabb anyagnak megfelelő helyről 1,74 g 13(3-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-1,3,5(10),9(11)- tetraén-14Sa,170-diol (Xb) nyerhető ki. Utóbbit éterből átkristályosítva op: 80-83 C°; (a)k5 = + 18,8° (c=l, etanol): Xmax =265 nm, e=20 300. Elemanalízis C20 H 28 0 3 -ra (316,4) vonatkoztatva: 5 számított: C 75,91% H 8,91%; talált: C 75,92% H 8,93%. Mycobacterium phlei (MNG 29) burgonyás fer-10 deagar táptalajon kinőtt 10-napos tenyészetét 5 ml 0,4%-os nátriumklorid-oldattal szuszpendálva 3-literes Erlenmeyer-lombikban lévő 1 liter táptalajra oltjuk. A táptalaj összetétele: 15 kukoricalekvár 20 g glicerin 10 g 1 literre töltve csapvízzel. A pH sterüezés előtt 7,0. A beoltott tenyészetet 37 C°-on 48 órán át inkubál-20 juk malomszitá- rázógépen (percenként 300 fordulat, 2,5 cm kitérés). A kinőtt tenyészethez, miután a pH-t 48 óra eltelte után 7,7-re állítottuk, 30 ml 96%-os alkoholban oldott 1 g XHb-t adagolunk. Az inkubálást az előzővel azonos körülmények között 25 tovább folytatjuk. A kiindulási vegyület átalakulását vékonyrétegkromatográfiás úton követjük; 72 óra után ez nem mutatható ki. A fermentációs folyadékot az 1. példában közölt módon feldolgozva 0,71 g 13j3-etü-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)-tet-30 raén-14R|3-ol-17-ont (Hlb) kapunk. Diizopropüéterből átkristályosítva op: 90-93 C°; (a)£,5 = -14,5° (c = 1, dioxán); Xmax = 265 nm, e = 20 600. Elemanalízis C20 H 26 0 3 (314,4) vonatkoztatva: 35 számított: C 76 45% H 8,33%: talált: C 76,oü% H 8,30%. 3. példa: 40 A 130-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)-tetraén-17Ra-ol-14-on (Va) előállítása 45 6,0 g 13/3-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gonal,3,5(10),9(ll)-tetraén 14Sa-ol-17-ont (IVa) az 1. példában közölt módon redukálunk. Az 5,89 g száraz maradékot preparatív rétegkromatográfiás úton választjuk szét, szintén az 1. példa szerint. 50 Az 1,1 g súlyú apolárisabb terméket 13|3-metil-3-me toxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)-tetraén -14Sa,17Ra-diol, XHIa metanolból átkristályosítva op.: 99-105 C°; (a)„=0°: Ámax =265 nm, e=19 200. 55 Elemanalízis C, 9 H 26 0 3 -ra vonatkoztatva: számított: C 75,46% H 8,70%; talált: C 75,42% H 8,71*. 60 A 2,02 g polárisabb termék (13|3-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(lO),9(ll)-tetraén-14Sal7S0-diol, Xa) aceton-petroléterből átkristályosítva megegyezett az 1. példában előállított Xa-val. A Nocardia sp. (MNG 67) törzsnek az 1. 65 példában leírt körülmények között előállított 4
