164050. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a D-gyűrűben hidroxil- és keto-csoportot tartalmazó 13béta-rövidszénláncú alkil 3-metoxi-8,14-szeko-gona-1,3,5/10/9/11/-tetraének előállítására
tenyészetéhez alkoholban oldva 0,4 g XIIIa-t adagolunk. Az inkubálást ugyancsak az 1. példa szerint folytatva a kiindulási vegyület 24 óra alatt teljesen átalakul. A fermetációs folyadékot az 1. példában leírt módon feldolgozva 0,24 g 13/3-metil- 5 3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)-tetraén-17R0-ol-14-ont (Va) kapunk. Diizopropiléterbó'l átkristályosítva op.: 99-102 C°: (a)2 v 5 = -43,8° (c = 1, dioxán): Xmax = 265 nm, e.= 20 400. 10 Elemanalízis Ci 9 H 2 4 0 3 -ra (300,4) vonatkoztatva: tátva: számított: C 75,96% H 8,05%; talált: C 75,81% H 8,16%. 15 4. példa: 20 A 13|3-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gonal,3,5(10),9(ll)-tetraén-17Ra-ol-14-on(Vb) előállítása. PeniciUium citrinum (MNG 74) burgonyás 25 ferdeagar táptalajon növesztett 10-napos tenyészetét 0,4%-os nátriumklorid-oldatban szuszpendáljuk. A szuszpenzióval 5 db 3-literes Erlenmeyer-lombikban levő 800-800 ml táptalajt oltunk. A táptalaj összetétele: 30 kukoricalekvár 20 g malátakivonat (nedves súly) 40 g szacharóz 30 g 35 1 literre töltve csapvízzel. A pH sterilezés előtt 7. A beoltott tenyészetet 24 C°-on 30 órán át inkubárjuk malomszita rázógépen, (percenként 300 fordulat, 2,5 cm kitérés). A tenyészethez 5x3 g 13j3-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)- 40 tetraén-14,17-diont (Ib) adagolunk vízben szuszpendálva, steril körülmények között. Az inkubálást az előzővel azonos körülmények között tovább folytatjuk. Ib átalakulását vékonyrétegkromatográfiás úton követjük. 90%-os átalakuláskor a 45 fermentációt befejezettnek tekintjük. A lombikok tartalmának egyesítése után a teljes fermetációs folyadékot 2x2500 ml toluollal kivonatoljuk. Az egyesített kivonatokat vákuumban 1500 ml-re bepároljuk, 7,5 g semleges alumíniumoxiddal 50 derítjük, majd vákuumban szárazra pároljuk. A száraz maradékot 750 ml acetonban oldjuk, 1,5 g aktív szénnel derítjük és szűrés után vákuumban szárazra pároljuk. A száraz maradékot diizopropiléterből kristályosítva, 8,0 g 13j3-etil-metoxi-8,14- 55 szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)- tetraén-14Sa-ol-17-ont (IVb) kapunk. Diizopropiléterből átkristályosítva op.: 90-95 C°; (a)?>5 =-9,8 0 (c = l, dioxán): ^•max = 265 nm, e = 20 300. Elemanalízis C20 H 26 0 3 -ra (314,4) vonatkoz- 60 tátva: számított: C 76,45% H 8,33%; talált: C 76,31% H 8,40%. 6S 10 6,0 g IVb-t az 1. példa szerint, azonban 4 órán keresztül redukálunk. A száraz maradékot (6,2 g) preparatív rétegkromatográfiás úton választjuk szét szintén az h példa szerint. Az 1,52 g apolárisabb terméket (13/3-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-1,3,5(10),9(1 l)-tetraén-14Sa, 17Ra-diol fXIIIb) éterből átkristályosítva op.: 133-135 C°: (a)D=0o : Xmax = 265 nm, e,= 20 500. Elemanalízis C20 H 28 0 3 -ra (316,4) vonatkoztatva: számított: C 75,91% H 8,91%; talált: C 75,94% H 8,97%. A polárisabb termék (2,8 g) éterből átkristályosítva megegyezett a 3. példában leírt 13j3-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(ll)-tetraén-14Sa,17-Sß-diollal (Xb). Ez az azonosság Vb szerkezetét igazolja. A Mycobacterium phlei törzs (MNG 29) 1 literes tenyészetét a 2. példában közöltek szerint állítjuk elő. Alkoholban oldva 1 g XIIIb-t adagolunk hozzá. 72 órás inkubálás után a kiindulási vegyület teljesen átalakul. A képződő 13f3-etil-3-metoxi-8,14-szeko-gona-l,3,5(10),9(l 1)tetraén-17Ra-ol-14-ont (Vb) az 1. példában ismertetett eljárással nyerjük ki, azzal a különbséggel, hogy a kristályosítást diizopropiléterben végezzük. A 0,28 g Vb-t diizopropiléterből átkristályosítva op.: 90-96 C°; (a)f)5=+9,6 0 (c=l, dioxán) Wx = 265 nm, e = 20 400. Elemanalízis C20 H 26 0 3 -ra (314,4) vonatkoztatva: számított: C 76,45% H 8,33%; talált: C 76,40% H 8,39%. 5. példa: A 13j3-metil-3-metoxi-8,14-szeko-gonal,3,5(10),9(ll)-tetraén-17S|3-ol-14-on (IIa) előállítása. Flavobacterium dehydrogenans (MNG 73) 7 napos, burgonyás ferdeagaron növesztett tenyészetéből 8 ml steril vízzel szuszpenziót készítünk és ebből l-l ml-rel oltunk 100-100 ml 0,44% káliumdihidrogénfoszfátot, 0,88% dinátriumhidrogénfoszfátot és 2,0% élesztőkivonát száraz anyagot tartalmazó 0,5 literes Erlenmeyer-lombikban sterilezett táptalajt. A lombikokat 37 C°-os termosztátszobában rázatva inkubáljuk 48 órán keresztül. A 2 napos tenyészet 5—5 ml-ével 25 db 0,5-literes Erlenmeyer-lombikban sterilezett 100-100 ml alábbi összetételű táptalajt oltunk: aszparagin 0,1% kukoricalekvár (szárazanyagtartalomra számítva) 0,1% élesztőkivonat (szárazanyagtartalomra számítva) 0,4% káliumdihidrogénfoszfát 0,1% glukóz 0,5% „nyomelem-oldat" 1,0% 5
