163626. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-triozin-O-szulfát-csoportot tartalmazó oktapeptidek előállítására

163626 3 4 peptidkémiában ismert módszerek szerint állíthatók eló', például egyes aminosavaknak lépésró'l lépésre való kapcsolásával vagy aminosavcsoportok kapcsolásával. Mint ismeretes ez úgy történik, hogy az aminosav vagy amínosavcsoport aminocsoportját megvédjük, például benziloxikarbonil-származékká való átalakítással, majd az ilyen aminosav vagy aminosavcsoport karboxilcsoportját aktiváljuk, például nitrofenilészter származékává való átalakításával. Az ilyen védett és aktivált közbülső' terméket azután egy szabad aminocsoportot tartalmazó másik aminosavval vagy aminosavcsoporttal reagáltatjuk. Alkalmas aktiváló csoportok például az aminosav savfunkcióját reaktívabbá tevő kombinációk vagy csoportok, mint a vegyes anhidridek, azidok, savkloridok, karbodiimidek reakciótermékei, reakcióképes N-acilvegyületék, O-acil-hidroxilaminszármazékok és aktív észterek, mint az elektronbefogó (negatív) szubsztituenseket tartalmazó alkilészterek, vinilészterek, enolészterek, fenilészterek, tiofenilészterek, nitrofenilészterek, 2,4-dinitrofenilészterek, triklórfenilészterek és nitrofeniltiolészterek. A nitrofenilészterek használata különösen előnyös a hozam, melléktermékek hiánya és ennélfogva a könnyű tisztíthatóság szempontjából. Peptidsorozatoknak a találmány szerinti létrehozása során az aminofunkciók megvédhetők az e célra használatos védőcsoportokkal, mint a benziloxikarbonil-, nitrobenzilkarbonil-, metoxibenzilkarbonil-, terc-butoxikarbonil-, ftalil-, o-nitrofenilszulfenil-, tozil- és hasonló csoportok. A karbonilcsoportok megvédésére metil-, etil-, terc-butil-, benzil-, nitrobenzil-, trimetilbenzil- és hasonló csoportok használhatók. A hidroxilcsoportok megvédhetők benzil-, terc-butil-, tetrahidropiranil- és hasonló csoportokkal. A védőcsoportok ismert reakciókkal távolíthatók el, ilyenek a nátriummal cseppfolyós ammóniában végzett redukció, hidrogénezés (például palládiumszén katalizátor jelenlétében), hidrogénhalogeniddel (például hidrogénbromiddal vagy sósavval) való kezelés ecetsavban vagy trifluorecetsavas kezelés. A szabad aminők előállítására ecetsavban való hidrogénhalogenides kezelés után a hidrobromidsót egy ioncserélő gyantával, például Amberlite IR 400-zal hozzuk érintkezésbe, vagy egy bázissal, például trietilaminnal közömbösítjük. Ha a kívánt peptidsorozat létrejött, annak tirozin-részét szulfatáljuk piridin-kéntrioxíd komplexszel való kezeléssel, és így a tirozin-O-szulfátot tartalmazó peptidekhez jutunk. Egy csoportnak, amilyen a tirozin-rész, a szulfatálása piridin-kéntrioxíd komplexszel való kezeléssel jól ismert művelet. A szulfatálást piridin-kéntrioxid komplexszel előnyösen úgy végezzük, hogy a peptidet egy iners oldószerben, például dimetilformamidban oldjuk, piridiíit adunk hozzá, majd hozzáadjuk a piridinkéntriöxid komplexnek egy iners oldószerrel, például piridinnel készült oldatát. Szobahőmérsékleten állni hagyva létrejön a tirozin-O-szulfát-szarmazék, és az vákuumban való bepárlás és a maradéknak vízzel való mosása után a szokásos módon elkülöníthető. Szulfatálás közben a peptid aminofunkcióját védeni kell, például egy védőcsoporttal, mint a terc-butoxikarbonil-csoport; ez utóbb hagyományos módon, például trifluorecetsavval eltá-5 volítható. A szulfatált termékek sói a terméknek a megfelelő savval, aminnal vagy fémes kationnal való reagáltatásával állíthatók elő. A találmány szerinti eljárást a következő példákban szemléltetjük. A hőmérsékleti adatokat Celsius-10 fokban adjuk meg. 1. példa L-Aszparagil-0-szulfato-L-tirozil-L'leucil-glicü-L-triptofil-L-leucil-L-aszparagil-L-fenilalanin-amid 15 a) terc-Butoxikarbonil-glicil-L-triptofil-leucil-L-aszparagil-L-fenilalanin-amid 500 mg terc-butoxikarbonil-L-triptofil-L-leucil-L-aszparagil-L-fenilalanin-amidot feloldunk 5 ml 20 trifiuorecetsavban, és az oldatot szobahőmérsékleten 10 percig állni hagyjuk. Euitán 100 ml étert adunk hozzá, a keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk, és vákuumban szárítjuk. Kitermelés 503 mg. 25 Az így kapott 503 g trifluoracetátot feloldjuk 8 ml dimetilformamidban, és jégfürdőben hirtelen lehűtjük. Ezután 0,25 ml trietilamint, majd 295 mg tercbutoxikarbonil-glicil-p-nitrofenilésztert adunk hozzá, és a keverék hőmérsékletét 20C°-ra emeljük. 30 4,5 óra múlva további 25 mg aktív észtert adunk hozzá, és a reakciókeveréket éjjelen át reagálni hagyjuk. Ezután lassan beleöntjük 0,5 ml ecetsavat tartalmazó 50 ml jeges vízbe. A kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk, szárítjuk, majd 50 ml for-35 rásban levő etilalkoholban oldva átkristályosítjuk. Kitermelés 300 mg, Olvadáspontja 190—192°. b) terc-Butoxikarbonil-L-leucil-glicil-L-triptofil-L-leucil-L-aszparagil-L-fenil-40 alanin-amid 1,87 g a) szakasz szerint kapott pentapeptidet feloldunk 15 ml trifiuorecetsavban, és szobahőmérsékleten 20 percig állni hagyjuk. Ezután a reakciókeverékhez 1 liter étert adunk, a csapadékot szűrés-45 sei elválasztjuk, és vákuumban szárítjuk. Kitermelés 1,75 g. Az így kapott 1,75 g trifluoracetátot 30 ml dimetilformamidban oldjuk, és jégfürdőben hirtelen lehűtjük. 0,34 ml trietilamint, majd 1,02 mg terc-50 butoxikarbonil-L-leucin-p-nitrofenilésztert adunk hozzá, és szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni. 16 óra múlva a reakciókeveréket 600 ml etilacetátba öntjük, és 3 óra hosszat hűtőszekrényben tartjuk. A terméket centrifugálással elválasztjuk, éterrel 55 mossuk, és vákuumban szárítjuk. Súlya 980 mg. Olvadáspontja 185—186°. c) terc-Butoxikarbonil-L-aszparagil-L-tirozil-L-leucil-glicil-L-triptofil-L-60 -leucil-L-aszparagil-L-fenilalanin-amid 1,3 g terc-butoxikarbonil-L-leucil-glicil-L-triptofil-L-leucil-L-aszparagil-L-fenilalanin-amidot 15 ml trifiuorecetsavban oldunk, és az oldatot szobahőmérsékleten 15 percig állni hagyjuk. A reakció-65 keverékhez 1 liter étert adunk, a keletkezett csapa-1