163508. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-formil-cefalosporánsav-származékok előállítására
163508 12 toluol—etilacetát rendszerben (1 : 1) Rf =0,93 (kiinduló anyag 0,30). O. p.: 178—180 °C (boml.). UV-színkép metilénkloridban amax 292 nm (e =13 900) A max =242 nm (e =3500). Az IR-színkép metilénkloridban többek között sávokat mutat 2,92; 5,54; 5,78; 5,88; 5,97; 6,22; 6,68; 7,28; 8,15; 8,59; 9,14; 9,49; 9,98; 11,58 mikronnál. A kiinduló anyagot a következő módon állítjuk elő: 4,0 g 3-acetoximetil-7/?-[N'-terc-butiloxikarbonil-D-(a)-fenilglicilamino]-cef-3-em-4-karbonsavat 50 ml vízben feliszapolunk. Ehhez 7,7 ml 1 n nátriumhidroxid-oldatot adunk és ilymódon átlátszó oldatot kapunk, amelyhez az ATCC 6633 törzsből származó Bacillus subtilisből kivont 0,1 g tisztított észterázt (lásd az 1,080.904 számú nagy-britanniai szabadalmi leírást) adunk. Az elegyet 35°-on keverjük és a reakcióoldat pH-ját 0,5 n nátriumhidroxiddal 7,3-as értéken tartjuk. 14,4 ml 0,5 n nátriumhidroxid elhasználása után a reakció befejeződik (5 óra). A reakcióoldat pH-ját 6,5-re állítjuk, aktívszénnel derítjük, azután körülbelül 120 ml etilacetáttal felülrétegezzük és keverés közben 5 m foszforsawal 2,2-es pH-ra savanyítjuk. A jéggel hűtött oldatot konyhasóval telítjük és a fázisokat szétválasztjuk. A vizes réteget 100—100 ml etilacetáttal kétszer extraháljuk és utána eldobjuk. A szerves kivonatokat 30—30 ml telített konyhasó-oldattal négyszer mossuk és rövid ideig vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk. Szűrés után a 3-hidroximetil-7/3-[N'-terc-butiloxikarbonil-D-(a)-fenilglicilamino]-cef-3-em-4-karbonsav-oldathoz ciklohexánban oldott difenildiazometánt adunk és 45 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a még gyengén vöröses színű oldatot körülbelül 200 ml-re betöményítjük, étert adunk hozzá és egy éjszakán át hűtőszekrényben állni hagyjuk. A közben kivált színtelen kristályos anyagot szűréssel elkülönítjük és hidegen éterrel mossuk. A kristályokat vákuumexszikkátorban szárítjuk és ilymódon 2,975 g 3-formil-7/?-(N'-terc-butiloxikarbonil-D-(a)-fenilglicilamino]-cef-3-em-4-karbonsav-difenilmetilésztert kapunk, amely 128°-on bomlik. A bepárolt anyalúg további terméket tartalmaz, amelyet oszlopkromatográfiával szilikagélen (MERCK puriss.) elkülöníthetünk. 3. példa Teljesen hasonló módon, mint ahogy a 2. példában leírtuk 3-hidroximetil-7/3-[N'-terc-butiloxikarbonil-D-(a)-fenilglicilamino]-cef-3-4-karbonsav-difenilmetilésztert di-(n-butil)-szulfoxiddal (redeszt.) és ecetsavanhidriddel kezelünk. A reakcióelegyet nagyvákuumban betöményítjük és a maradékot éter és víz elegyében felvesszük. A rétegeket szétválasztjuk és az éteres fázist vízzel többször extraháljuk. A vizes fázisokat 2 adag éterrel utánextraháljuk és eldobjuk. Az egyesített szerves kivonatokat magnéziumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson az oldószertől megszabadítjuk. A maradékot a 2. példában leírt módon oszlopkromatográfiás úton szilikagélen tisztítjuk és ilymódon a 2. példa szerinti terméket kapjuk. 4. példa 0,77 g 3-hidroximetil-7/?-[5'-ftálimido-5'-difenilmetoxikarbonil-D-n-valeroilamino]-cef-3-em-4-karbon-5 sav-difenilmetilésztert 15 ml abszolút dimetilszulfoxid és 15 ml ecetsavanhidrid elegyében oldunk. A gyengén sárga színű oldatot 6 óra hosszat sötétben szobahőmérsékleten tartjuk. A barnás-sárga reakcióelegyet abszolút toluol hozzá-10 adása mellett nagyvákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 50-szeres mennyiségű szilikagélen (MERCK puriss.) kromatográfiás úton tisztítjuk. A vékonyrétegkromatográfiásán tiszta 3-formil-7/?-[5'-ftálimido-5'-difenilmetoxikarbonil-D-n-valeroil-amino]-cef-3-4-kar-15 bonsav-difenilmetilésztert metilénklorid +2—3% metilacetát eleggyel eluáljuk. Az egységes frakciókat egyesítjük és dioxánból liofilizáljuk. A nagyvákuumban szárított amorf vegyület metilénkloridban mért IR-színképe többek között a következő 20 abszorpciós sávokat mutatja: 2,90; 5,55; 5,62; 5,74; 5,81; 5,89; 5,93; 6,23; 6,68; 7,20; 8,16; 8,47; 9,15 mikron. A termék vékonyrétegkromatogramban szilikagélen 25 a következő Rf -értékeket mutatja (bizonyítás jódgőzzel vagy UV254mn -el): toluol—aceton rendszerben (4 : 1) Rf =0,63 (kiinduló anyag: 0,20), toluol—aceton rendszerben (2 : 1) Rf =0,84) 30 (kiinduló anyag: 0,38), toluol—etilacetát rendszerben (1 : 1) Rf =0,82 (kiinduló anyag: 0,17). 5. példa 35 1,03 g 3-hidroximetil-7/?-fenilacetilamino-cef-3-em-4--karbonsav-difenílmetilésztert feloldunk 10 ml abszolút dimetilszulfoxid és 6 ml megolvasztott benzoesavanhidrid elegyében és az oldatot szobahőmérsékleten 16 órán 40 keresztül sötétben állni hagyjuk. A reakcióoldatot ezután nagyvákuumban bepároljuk, a maradékot metilénkloridban felvesszük és 0,5 mólos dikáliumhidrogénfoszfát-oldattal többször kirázzuk. Ezt követően a szerves fázist vízzel mossuk, magnéziumszulfát felett 45 szárítjuk és csökkent nyomáson az oldószertől megszabadítjuk. A nyersterméket 50 g szilikagélen (MERCK puriss., 5% vízzel dezaktivált) kromatografáljuk. A 3-formil-7/S-fenilacetilamino-cef-3-em-4-karbonsav-difenilmetilész-50 tért először metilénkloriddal eluáljuk és eluálhatjuk metilénklorid+1% metilacetát eleggyel. A vékony rétegkromatográfiásan egységes frakciókat egyesítjük és benzol—ciklohexán elegyből kikristályosítjuk. A termék gyengén sárgás kristályait az oldószer tökéletes 55 eltávolítása végett nagyvákuumban 48 óra hosszat 50°-on szárítjuk. Az ilymódon kapott termék 124— 125°-on (nem korrigált) olvad. Az optikai forgatóképesség: [a]2 ,? = -95,5° ±2° (c =0,207 dioxánban). 60 6. példa 1,03 g 3-hidroximetil-7/?-fenilacetilamino-cef-3-ern-4--karbonsav-difenilmetilésztert az 5. példához hasonlóan 10 ml tetrametilénszulfoxiddal és 5 ml ecetsavanhidrid-65 del egy éjszakán át való állás közben reagáltatunk. 6
