163492. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kreatinin-amidohidroláz előállítására

163492 vek, a lakmuszt meglúgosítják és alkalmasak denitrifikációra. A következő tulajdonságokat állapítottuk meg továbbá: növekedés 4 °C-on — növekedés 41 °C-on — zselatin cseppfolyósítás — tributirin-hasítás —tojásfehérje reakció — pigmentképzés — A következő vegyületek erjesztése: arabinóz + glükóz + maltóz (+) cellobióz (+) trehalóz + 2-keto-glükonát + mannit (+) m-inözit — glikollát < •;.;'. ~T pelargonát — adipát — p-hidroxi-benzoát -- '-•'•+fenilacetát — valin ' : ' arginin ""<+) ő-amino-valerát — triptofán — betain + nippurai acetamid benzilamin — A jelenlegi ismeretek szerint a csirák az Achromobacteriaceae családba tartoznak és nagy valószínűséggel az Alcaligenes fajtához sorolhatók. A Penicillium WS 90 001 törzs morfológiailag, azaz mikroszkóposán teljesen megegyezik a többi Penicilliumféleséggel. Növekedése minden ismert gombatáptalajon jó vagy igén jó; sörcefrén, malátaextraktumot tartalmazó táptalajon, Czapek—Dox-táptalajon és Henneberg, illetve Woeltche-féle szintetikus táptalajon (mely nádcukrot, aszparagint, káliumfoszfátot, magnéziumfoszfátot és vizet tartalmaz) jó növekedést mutat. Ahhoz, hogy a kívánt enzimeket a találmány szerint alkalmazott mikroorganizmusokban adaptáció segítségével feldúsítsuk, a tenyésztéskor kreatinint kell a tenyésztő közeghez adni. Mindkét mikroorganizmust előnyösen olyan táptalajon tenyésztjük, amely szénforrásként glükózt vagy glicerint, továbbá kreatinint, sókat és vitaminokat tartalmaz a mikrobiológiában szokásos mennyiségben és összetételben. Különösen előnyös például a következő összetételű táptalaj: 0,5súly% : 0,5 súly% 0,08 súly% Q,02súly% glükózt vagy glicerint, kreatinint, ammóniumszulfátot, magnéziumszulfát-hidrá-tOt; ' '.,. '. i

ÍX^Í^ nyomni mennyiségű 0,05 súly% 1—1 mg 0,1 mg vasszulfátot, kalciumkloridot, mangánszulfátot, élesztőextraktumot, nikotinsavat, tiamin-p-aminobenzoesavat, B6 vitamint, biotint 10 feloldunk 0,1 mólos káliumfoszfát-pufferben; melynek pH-értéke a Penicillium esetében 6, illetve az Alcaligenes esetében 7. A találmány szerinti mikroorganizmusok törzsfenntartása a szokásos módon egy ferde agar-csőben törté-15 nik, amelyben olyan 2% agartartalmú — előnyösen a fentiekben megadott — táptalaj van, amelyhez literenként még 5 ml 0,05%-os brómtimolkék-oldatot is adtunk. Ez az indikátor előnyös növekedési feltételek mellett a találmány szerinti gomba esetében 4—6 nap 20 után, a baktérium esetében 2—3 napon belül jól láthatóan átcsap a lúgos tartományba, a kreatinin-kreatinlebontás következtében. A kreatinint felhasználó olyan mikroorganizmusok, amelyek a lebontást nem a fent említett anyagcsereséma szerint végzik a fent nevezett 25 enzimekkel, nem mutatják az említett lúgosodást. A találmány szerinti alkalmazandó mikroorganizmusok lehetővé teszik a kreatinin-amidohidroláz és kreatinamidinohidroláz gazdaságos kinyerését a feltárásuknál kapott vízoldható fehérjefrakcióból. 30 A következő példák kapcsán a találmányt részletesebben ismertetjük. 35 1. példa Aktív gomba-micélium feldúsítása rázott tenyészetben 2 1 táptalajt, amely 1 súly% glükóz, 0,5 súly% 40 kreatinin, 0,08 súly% ammóniumszulfát, 0,02 súly% magnéziumszulfát-heptahidrát, 0,05 súly% élesztő extrakt, 1—1 mg nikotinsav, tiamin-p-aminobenzoésav és B6

vitamin, 0,1 mg biotin, nyomnyi mennyiségű vasszulfát, kalciumklorid és mangánszulfát, 0,10 mólos, 45 6'os pH-értékű káliumfoszfát-pufferrel készített oldatából áll, megfelelő rázólombikban beoltjuk 200 ml Penicillium WS 90 001 48 órán át előtenyésztett kultúrájával és rázókészülékben 4 napon át tenyésztjük. Ezen idő alatt a kreatinintartalom 0,5%-ról alig 0,1%-ra csökken 50 és a glükóz közel teljesen elhasználódik. Eközben a pH-érték 7,5—8,0-ra emelkedik. Ily módon 3—4 g szárazanyagsúlyú WS 90001 micéliumot kapunk 1 1 tenyészoldatonként, melynek aktivitása 45—60 Ilí/g szárazanyagsúly kreatinin-amidohidroláz. 55 Az alkalmazott Penicillium-törzs inokulumát a következőképpen készítjük: Erősen spórázott Penicillium-törzset tartalmazó ferde agaros csövet steril táptalajjal (amelynek összetétele a 60 fentiekben leírt) lekaparunk és szuszpendálunk, és a spóraszuszpenziót 1 literes, 200 ml fenti összetételű táptalajt tartalmazó rázólombikba visszük át steril körülmények között. A lombik tartalmát 48 órán keresztül rázatjuk, majd a fenti 2 liter táptalaj beoltására használ-65 jukfel. 2