163461. lajstromszámú szabadalom • Berendezés sejtek tenyésztésére

5 163461 6 gázalakú nyersanyagokat vagy termékeket tartalmazó tartályokkal, vagy megfelelő gázszűrőkön keresztül érintkezhessenek az atmoszferikus környezettel. így például az egyik nyílást olyan kis csőtoldakékkal szerelhetjük fel, amely a nyílást a folyékony közeg 5 vagy sejtszuszpenzió adagolására és kiürítésére szolgáló csővel köti össze. A szemben levő tartókorong másik nyílását hasonló módon gázszűrőhöz csatlakoztathatjuk, a feleslegben levő gáz (például széndioxid) eltávolítására vagy a rendszer és a külső levegő közötti egyensúly 10 biztosítására. A találmány egyik előnye, hogy a berendezés egy bemeneti-kimeneti kivezető nyíláson és kiszolgáló csövön keresztül ellátható szakaszos üzemeltetés esetén, a berendezéssel azonban folyamatos átáramlás is bizto- 15 sitható, ha a nyílásokat, a csövek egyik végén egyidejűleg a beáramlásra, a másik végén a kiáramlásra alkalmazzuk. A folyamatos megoldás előnye, hogy segítségével biztosítani lehet a folyadékcserét a sejttenyésztés során. Ez a lehetőség is igazolja a találmány szerinti berendezés 20 alkalmazhatóságát és sokoldalúságát a kétféle üzemmód és automatizálás esetén. A kiszolgálócső valamely, előnyösen rugalmas anyagból készült cső vagy vezeték lehet. Azt találtuk, hogy 25 előnyös, ha a tenyésztőcsövek mindkét végén vastagfalú szilikongumi vagy egyéb sterilizálható anyagból készült csövet alkalmazunk. A kiszolgálócsövet a kezelés megkönnyítésére például külön kezelhető szeleppel vagy előnyösen szorítókapoccsal láthatjuk el. A gázszűrő 30 egyszerűen gyapottal-gyapjúval megtömött cső lehet, amelyet a kiszolgálócsőhöz csatlakoztatunk; gázszűrőként alkalmazhatunk baktériumszűrőt (például Seitztípusú szűrőt) vagy membránszűrőt. Az utóbbi két esetben a szűrőket közvetlenül a kivezető nyílásokhoz 35 csatlakoztatjuk. A centrális tartóelem egyik végéhez háromágú szorítóelemet rögzíthetünk, amely a tartókorongra egyenletes nyomást gyakorol. A nyomás beállítása úgy történhet, hogy a szorítóelem külső részén levő csavart a kívánt 40 csavarási nyomatékra állítjuk be. A nyomás megfelelő beállítását a tartókorong lemezei közé helyezett tömítés vastagsága jelezheti. így például, ha a tömítés keménygumi, a tömítés vastagságát a nyomással felénél kisebbre is csökkenthetjük. 45 A kultúrákat tartalmazó edényeket a szokásos dobforgató berendezéssel forgathatjuk. A dobforgató például a készülék két végén párosan elhelyezkedő kerekekből áll, amelyek a tartókorong hengeres felületét támasztják alá. A kerekek közül egyet vagy többet összekötünk 50 a hajtóművel, a többi pedig szabadon forog, és hozzájárul a forgásban levő edény alátámasztásához és elhelyezéséhez. Mindkét típusú kereket általános tartószerkezetre, így vázra, alapépítményre vagy mozgatható szerkezetre szerelhetjük. 55 Célszerű a — például elektromotorral hajtott — forgatógép-szállítótargonca kombináció alkalmazása, ennél ugyanis a kezelési igény minimális. Üzem közben a tenyésztő edényt — egyrétegű kultúrák esetén — 4—60 ford/óra sebességgel forgathatjuk. A fenti határo- 60 kon kívül a sejtek eloszlása a csövek falfelületén távolról sem egyenletes, s ez lerontja a forgatás kedvező hatását. A beoltott sejtek eloszlatására szolgáló optimális forgatási sebességet 5—20 fordulat/óra, előnyösen 10—15 fordulat/óra sebességnek találtuk. Szuszpenziós kultúrák 65 esetén kb. 10—30 ford/perc sebességet célszerű alkalmazni. A találmány szerinti berendezés könnyen lekapcsolható az általános hordozó és forgató eszközről és könnyen átfordítható oly módon, hogy a tenyésztő csövek helyzete függőleges legyen. A folyékony közeget ekkor a bevezető-kivezető nyílással összekötött kiszolgálócsövön keresztül juttathatjuk a berendezésbe. A folyékony közeget a szállító szifonból a nehézségi erő segítségével, vagy a szifon levegőbevezetésére gyakorolt légnyomás segítségével juttathatjuk a berendezésbe. A folyadék ürítését a tenyésztési eljárás végén úgy oldhatjuk meg, hogy a berendezés említett részét fordított helyzetbe hozzuk és a folyadékot a kifolyónyíláson és a hozzácsatlakoztatott kiszolgálócsövön keresztül alkalmas steril tartályba eresztjük be. A találmány szerinti berendezést az alábbi önmagában ismeretes eljárás segítségével alkalmazhatjuk egyrétegű sejtkultúrákban tenyésztett vírusok vagy vírus-antigének termelésére. A beoltott sejtszuszpenziót tartalmazó tápközeggel töltött tenyésztőedényt kis sebességgel forgatjuk, és a rendszert 37 C°-on addig inkubáljuk, amíg a teljes egyrétegű sejttenyészet ki nem alakul. A tápközeg eltávolítása után betápláljuk a szuszpendált vírusinokulumot tartalmazó fenntartási közeget,és aforgatást folytatva a vírusokat adszorbeál tatjuk. Ezután további fenntartási közeget adunk az edénybe, és a rendszert állandó forgatás közben a vírusszaporodáshoz szükséges hőmérsékleten tovább inkubáljuk. A sejtmentes vírust vagy antigént a közeg leöntésével és/vagy a sejthez kötött vírust vagy antigént a csőfalon levő sejtek ismert fizikai vagy kémiai módszerekkel történő eltávolításával nyerjük ki. Az alábbiakban a találmány egy kiviteli alakját mutatjuk be a mellékelt rajzok segítségével. Az 1. ábra a tenyésztő edény hossztengelye szerinti metszet egy részlete. A 2. ábra az egyik tartókorong belső felületének síknézete. A 3. ábra a berendezés oldalnézete, a csőcsatlakozások, a kiszolgálócsövek és a járulékos szerelvények feltüntetésével. A 4. ábra a mozgatható targoncán elhelyezett összeszerelt berendezést mutatja be a görgőkkel és a forgató eszközzel. Az 5. ábra a találmány szerinti berendezést tartalmazó folyamatos működésű, automatizált rendszer folyamatábrája. Az 1—4. ábrákon feltüntetett berendezés 18 db szabványos 1 boroszilikátüveg tenyésztőcsövet tartalmaz. (Az ábrán két cső látható.) Az egyes csövek átmérője és hossza lényegileg megegyező, 4 cm, illetve 60 cm. A csöveket, 6, illetve 12 csövet tartalmazó csoportokba szereltük össze, a csoportokat két koncentrikus kör formájában a centrálisán elhelyezett négyszögkeresztmetszetű 2 összekötű rúd körül helyeztük el. A csöveket a 3 tartókorong fogja szorosan össze és csatlakoztatja egymáshoz. A 3 tartókorong két szorosan' összeillesztett részből áll: a 3a lemez nylon polimerből, a 3b lemez acélból van készítve. Az 1 tenyésztőcső egyik végével a 3a lemezen fekvő 5 alumínium illesztőlemez segítségével a 3a lemezen levő 4 bemélyedésekbe van helyezve és rögzítve. Az 1 teriyész-3