163461. lajstromszámú szabadalom • Berendezés sejtek tenyésztésére
7 163461 8 tőcsöveket az 5 alumínium illesztőlemez 6 lyukjai segítségével rögzítjük és védjük meg az oldalirányú elmozdulás ellen. A 3a lemezen belüli közlekedőcsatorharéndszer a 7 gyűrűs furatokból és a 10 közlekedő csatornából áll. A 7 furatokat a 8 nyílások kötik össze az 1 tényésztőcsovel, a 10 közlekedő csatorna pedig egymással. A furatok a 9 keménygumi tömítéssel varinak borítva (äelldam Rubber Co). A tömítéseket a 3a lemez felületéhez a 3b lemez szorítja hozzá, s ilyen módon vízálló steril feltétéleket biztosít a tényésztőcsőben. Az egyik 3 tartókorong 10 közlekedő csatornája az egyik lemezen az egyetlen 12a bemenő-kimenő nyíláson keresztül a 11 kiszolgáló csőhöz, a másik 3 tartókorong 10 közlekedő csatornája a 12b nyíláson keresztül a 13 csőcsatlakozáson vagy csőtöldálékon keresztül a 18 gázszűrőhöz csatlakozik. Az egész rendszer tömítésének javítására a tenyésztőcsövék pereme és a 4 bemélyedések alja közé lágy anyagból készült csőtömítést helyeztünk. A 2 összekötőrudat a centrális 14 illesztőnyílásban helyeztük el. A nyílás méretei olyanok, hogy a rudat szorosan és feszesen a helyén tartják. A rúd végére a 15 háromágú szorítóelem van helyezve, ez az összeszerelt berendezés 3b lemezére illeszkedik. Az összekötőrűd külső menetes végén levő 16 anyacsavar a 15 szorító elém külső részéhez illeszkedik, beállításával lehet a hatásos tömítéshez szükséges nyomóerőt biztosítani. A rúd másik végét össze lehet hegeszteni a háromágú elemmel. Mint a 3. ábrán látható, a 12a bemeneti- kimeneti nyílás a 13 csőcsatlakozás segítségével az ábrán fel nem tüntetett szállítószifonnal összekötött vastagfalú szilikon 11 kiszolgáló csőhöz és az áramlási sebesség ellenőrzésére szolgáló 17 szorítőkapocshoz csatlakozik. A 13 csőcsatlakozással szirítén ellátott másik 12b nyílás, a 18 gázszűrőberendezéshez csatlakozik. Ez a berendezés üveggyapottal töltött szűrőből áll, a csatlakozásra egy rövidebb vastagfalú szilikongumi-cső szolgál. A 4. ábrán a targoncával kombinált forgatógép látható, amely a fenti berendezés általános hordozószerkezeteként működik, továbbá a berendezés forgatására szolgál. A gép egy 19 rherev négyszög-keresztmetszetű acélkeretet tartalmaz, amelyen felül a 20 acélasztal helyezkedik el, ez alá pedig a 21 kerekeket forgató hajtómű és a 22 motor van szerelve. A berendezés edényei az asztalon forgatás esetén vízszintesén helyezkednek el, kezelés esetén függőlegesen állnak. Az 5. ábrán bemutatjuk a vakcinagyártás szempontjából fontos berendezések csatlakoztatását az automatikus berendezésben a fentiekben ismertetett tenyésztőedényhez. A sejtkultúrát, tépközeget, víruscsírákat, fenntartóközeget és az enzimet tartalmazó A, B, C, D, illetve E tartályokat steril szeleppel látjuk el. A szelepeket az F szabályozó rendszer mechanikusan működteti, a szabályozó rendszer programozásával biztositható az előre meghatározott program szerint történő anyagáramlás. A túlfolyt folyadékmennyiség és a hulladékanyagok összegyűjtésére a H hulladéktartály szolgál, amelyet a G tenyésztőedény és a végtermék tárolására szolgáló I tartály között helyezhetünk el. A berendezés működését az alábbi példa segítségével mutatjuk be. 1. példa 7 X 108 csirkeembrió-sejtet steril körülményék között, szokásos üvegedényben felszuszpendálunk 2,7 liter 5 borjúszérumot tartalmazó Eagle-féle közegben (Éagle H., Science, 1955. 122. 501). A fenti edényt targoncán függőleges helyzetbe helyezve 13,5720 cm2 tenyészfelületű tenyésztőédényt készítünk. Az edény bemenőkimenő csövét az alsó tartókoronghoz kötjük, a légszűrőt 10 szabadon hagyjuk. Az üveget szállítószifonhoz, a szifont a bemeneti- kimeneti csőhöz csatlakoztathatjuk. A szuszpenziót ezután a nehézségi erő segítségével a tenyésztőedénybe visszük át, az áramlást rugós szorítókapocs segítségével szabályozzuk. 1 cm2 tenyészfelületre 0,2 ml 15 tápközeg jut, amely 5 X104 sejtet foglal magában. A tápközeg magasságban a tenyésztőcső 1 / 5 részét tölti ki. Ilyen módon biztosíthatjuk az előnyös 1: 4 gáz : folyadék arányt. A berendezést ezután hirtelen 90°-kal elforgatjuk és 5 ford/óra sebességgel 4—5 napon keresz-20 tül vízszintes helyzetben forgatjuk, miközben az; edényt 37 C°-on inkubáljuk. Ez a sebesség az optimális a sejtadszorpció szempontjából. Mint a mikroszkópos vizsgálattal megállapítható, ez alatt az idő alatt tökéletes sejtréteg alakul ki. A vizsgálat céljára beépített meg-25 világítással rendelkező mikroszkópot és 4 cm-es cső részére szolgáló rögzítőeszközt használunk. Ezután a tenyésztőedényt függőleges helyzetbe hozzuk és a tápközeget nehézségi erővel a tenyésztőedényből szifonüvegbe visszük, majd a sejtréteget kiegyenlített sóoldattal 30 mossuk. 10 TCLDJ0 (TCLD 50 = 50%-os sejtkultúra-fertőző dózis) titerű Newcastle-vírus inokulumót 150 ml „Maintenance Medium 199"-bén szuszpendálunk (Morton és mtsai. Proc. Soc. Exptl. Biol. Med., 1950, 73 1), 35 majd a szuszpenziót kb. 0,01 ml/cm2 tenyészfelületű tenyésztő edénybe visszük. Az edényt vízszintes helyzetben 1—3 órán keresztül forgatjuk, és így a vírusokat adszorbeáltatjuk. A sejtréteget ezután az előbbi közeggel átöblítjük, majd a fentiekhez hasonlóan 2,7 liter fenn-40 tartási közeget táplálunk az edénybe és a forgatott berendezést a vírusszaporodáshoz szükséges hőmérsékleten inkubáljuk. A sejtmentes vírust időnként elkülönítjük. E célból a közeget az edényből steril tartályba eresztjük le és friss 45 közeggel töltjük fel. Az elkülönítés során a tenyésztő edényt minden esetbén függőleges helyzetben tartjuk. A sejthez kötött vírust tripszin-versen (ED7A) oldat bevezetésével különítjük el, majd az oldat bevezetése után az edényt néhány percig forgatjuk, hogy a sejtek 50 az edény faláról leváljanak. * Szabadalmi igénypontok: 55 1. Berendezés sejtek tenyésztésére, azzal jellemezve, hogy azonos hosszúságú tenyésztőcsövei (1), egy centrálisán elhelyezett tartóeleme (2) és a tartóelemre szerelt és a tenyésztőcsövek két végére tengelyirányú nyomást kifejtő, a belsejükben valamennyi tenyésztőcsövet össze-60 kötő közlekedő csatornákat (7, 10) tartalmazó, a csövek rögzítésére és tartására alkalmas módon kialakított, a csövekkel együtt hermetikusan zárt edényt képező, egy általános tartószerkezethez leszerelhető módon csatlakozó és förgatóeszközzel gördíthető tartókorongjai 65 (3) vannak, és a tartókorongoknak áramlásszabályozó 4
