163148. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az aminocsoportok megvédésére piridil-metoxikarbonil-csoporttal, főképp a peptidszintézis során
163148 13 14 szárazra való bepárlás után olajat kapunk, ezt 30 ml víz és 15 ml etilacetát keverékével felveszszük. A keveréket keverjük, dekantáljuk, a vizes fázist 15 ml etilacetáttal és 2 ízben 15 ml éterrel mossuk. A vizes fázist 20 torr nyomáson 55°-on szárazra pároljuk. 0,3 torr nyomáson 20°on megszárítva 550 mg trietilamin-N-(3-piridil-metoxikarbonil)-glicinátot kapunk olaj alakjában. Rf = 0,82 (kovasavgélen, 5:20:6:24 térfogatarányú n-butanol-piridin-ecetsav-víz rendszerben). Az 550 mg trietilamin-N-(3-piridü-metoxikarbonil)-glicinátot 30 ml desztillált vízben oldjuk. Ezt az oldatot 10 ml hidroxilfázisú Dowex 1x2 ioncserélő műgyantával negyed óra hosszat keverjük. A gyantát szűréssel elválasztjuk, 50 ml desztillált vízzel mossuk, majd 25 ml n sósavval negyed óra hosszat keverjük. A gyantát szűréssel ismét elválasztjuk, majd 50 ml desztillált vízzel mossuk. A szüredéket 13 torr nyomáson 50°on szárazra pároljuk. A maradékhoz 30 ml étert adunk, és 20°-on való 24 órai állás után a csapadékot szűréssel elválasztjuk. Ily módon 371 mg N-(piridil-metoxikarbonil)-glicin-hidrokloridot kapunk. 17. példa 150 mg glicint feloldunk 4 ml desztillált víz, 6 ml terc-butanol és 0,7 ml trietilamin elegyében. Hozzáadunk 765 mg a 4. példában leírt módon készült vegyes (3-piridil-metil)-(2,4,5-triklórfenil)-karbonátot, és a reakciókeveréket 60°-on 2 óra hosszat keverjük. 55°-on 20 torr nyomáson szárazra párolva olajat kapunk, ehhez hozzáadjuk 30 ml desztillált víznek és 15 ml etilacetátnak a keverékét. A keveréket keverjük, dekantáljuk, a vizes fázist 15 ml etilacetáttal és 2 ízben 15 ml éterrel mossuk, majd a vizes fázist 20 torr nyomáson 55°-on bepároljuk. 0,3 t rr nyomáson 20°-on való szárítás után 480 mg trietilamin-N-(3-piridil-metoxikarbonil)-glicinátot kapunk olaj alakjában. Rf = 0,82 (kovasavgélen, 5:20:6:24 térfogatarányú n-butanol-piridin-ecetsav-víz rendszerben). A termék azonos a 16. példa szerint olaj alakjában nyert termékkel. 28. példa 1,4 g Na -(terc-butoxikarbonil)-L-a,7-diaminovajsavat feloldunk 13 ml desztillált víz, 19 ml terc-butanol és 2,22 ml trietilamin elegyében. Hozzáadunk 2,02 g az 1. vagy 2. példa szerint kapott vegyes (3-piridil-metil)-(p-nitrofenil)-karbonátot, és a reakciókeveréket 50°-on 16 óra hosszat keverjük. 20 torr nyomáson 50°-on szárazra párolva olajat kapunk, ezt feloldjuk 5 ml 1:9 térfogatarányú metanol-l,2-diklóretán elegyben. Az oldatot 25 g szilíciumdioxidot tartalmazó, 1 cm átmérőjű, 40 cm magas oszlopon kromatografáljuk. 1:9 térfogatarányú metanol-1,2--diklóretán eleggyel eluálunk. Az első 30 ml eluátum a kiindulási p-nitrofenolt és vegyes karbonátot tartalmazza; az ezután eluált 150 ml oldatot 20 torr nyomáson szárazra párolva 1,3 g trietilamin-Na -(terc-butoxikarbonil)-N 7 -(3-5 -piridil-metoxikarboni^-L-a^-diaminobutirátot kapunk olaj alakjában. Ebből a termékből 1,2 g-ot feloldunk 2 ml desztillált vízben, és a kapott oldatot átbocsátjuk egy hidroxilfázisú Amberlite IRA 400 ioncserélő 10 műgyanta oszlopon. 250 ml desztillált vízzel mossuk, majd a terméket 250 ml n ecetsavval eluáljuk. Az eluátumot liofilizálva 0,53 g N„ -(terc-butoxikarbonil)-Ny -(3-piridil-metoxikarbonil)-L-a^-diaminovajsav-acetátot kapunk. Rf =0,74 (kovasavgélen, 5:20:6:24 térfogatarányú n-butanol-piridin-ecetsav-víz rendszerben), összetétel: számított: 20 C=52,30%; H=6,58%; N=10,16%; talált: C=51,56%; H=6,66%; N=10,44%. 15 25 45 19. példa 0,91 g D-lizin-monohidrokloridnak 8 ml víz, 12 ml terc-butanol és 3,5 ml trietilamin elegyével készült oldatához hozzáadunk az 5. példa szerint készült 3,2 g vegyes (N-oxido-3-piridil-metil)-(p-30 -nitrofenil)-karbonátot. Négyórai keverés után a reakciókeveréket 20°-on 20 torr nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 100 ml vízben oldjuk, hozzáadunk 40 ml hidrogénfázisú Dowex 50 műgyantát, és 15 percig keverjük. A műgyantát 35 szűréssel elválasztjuk, majd 3 ízben 50 ml vízzel mossuk. A szüredéket és a mosóvizet 2 ízben 150 ml éterrel mossuk. A vizes oldatot 20 torr nyomáson 50°-on szárazra pároljuk, és a terméket 0,3 torr nyomáson 20°-on megszárítjuk. Így 40 1,78 g di-Naj£ -(N-oxido-3-piridil-metoxikarbonil)-D-lizint kapunk. Rf = 0,18 (kovasavgélen, 50:20:6:24 térfogatarányú n-butanol-piridin-ecetsav-víz rendszerben). 20. példa 1,17 g L-valint feloldunk 4 g diciklohexilamin, 8 ml desztillált víz és 12 ml terc-butanol elegyégo ben. Hozzáadunk 3,34 g az 5. példa szerint készült vegyes (N-oxido-3-piridü-metil)-(p-nitrofenil)-karbonátot. A reakciókeveréket 60°-on 2 óra hosszat keverjük, és meggyőződünk róla, hogy ninhidrinnel nem ad pozitív reakciót. Kb. 55 20°-ra hűtjük, és a sárga csapadékot szűréssel eltávolítjuk. A szüredéket 20 torr nyomáson 50°on szárazra pároljuk. Az így kapott sárga maradékot éterrel mossuk, majd 10 ml etanolban oldjuk, és 70 ml petroléter hozzáadásával kiválaszt-60 juk. 5 g részben kikristályosodott olajat kapunk, ezt 0,3 torr nyomáson megszárítjuk. A terméket 500 ml vízben oldjuk, és hozzáadunk 200 ml hidrogénfázisú Dowex 50 műgyantát. A szuszpenziót 30 percig keverjük, a műgyantát szűréssel 65 elválasztjuk, és a szüredéket liofilizáljuk. Ily
