162943. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyszerkönyvi tisztaságú neomicin-szulfát előállőállítására, tisztítással
5 162943 6 dó útján megkötő, színtelenítő gyantával (pl.: ASMIT173N, DUOLITES-30, WOFATIT EZ stb.) töltött oszlopon történő átvezetés után és/vagy az ebből kinyert terméket melegen, célszerűen 60 C°-on, ismert módon aktív szénnel történő derítés után metanollal történő kicsapással dolgozzuk fel. A színtelenítő gyantán a fermentáció során képződött színanyag eltávolítható, ha magát a szűrt és savanyított fermentlevet átvezetjük rajta. A színtelenített fermentlevekből a neomicin kationcserélőgyantás kinyerése lényegesen jobb hatásfokkal valósítható meg, ugyanis a színanyagok jelentős ioncserélő kapacitást kötnek le. így a karboxil-típusú kationcserélő gyanta minimálisan 10%-al több neomicint képes megkötni a nem színtelenített léhez viszonyítva. A kationcserélő gyantáról eluált neomicin tartalmú oldat vagy a bepárolt és savanyított eluátum egyidejűleg megemelkedett színanyagtartalma szintén előnyösen eltávolítható a színtelenítő gyanta savas pH-intervallumban való alkalmazásával. Ilyenkor jelentős mennyiségű egyéb színtelenítést végző anyag alkalmazása válik feleslegessé, mint pl. a biztonságos! elektromos töltésénél fogva a színanyagok jelentós részére hatástalan. Ezért még egyéb színtelenítő hatású mértékben csökken a felhasznált aktív szén mennyisége. Az így kapott színtelenített oldat már minimális mennyiségű színanyagot tartalmaz, s ezen oldatból - és/vagy az ebből ismert úton kapott termék vizes oldatából — a preparatív szerves kémiában használatos melegen, célszerűen 60 C°-on történő szenezéssel és szűréssel, majd az így nyert színtelen oldat ismert úton történő feldolgozásával jóval magasabb kitermeléssel kapjuk a minőségileg megfelelő készterméket az eddig ismert és használt eljárásoknál. Az eljárás előnyeként megemlítjük, hogy idegen anyagok bevitele nélkül, egyszerű úton eljárva képesek vagyunk biztonságosan - a szűrt fermentiere vonatkoztatva 80% körüli kitermeléssel -olyan késztermékeket előállítani, melynek tisztasági fokára jellemző, hogy a VI. Magyar Gyógyszerkönyv követelményeinek megfelel. A találmány szerinti eljárást, illetve annak gyakorlati kivitelezési módját az alábbi példaként ismertetett leírásokban mutatjuk be, melyek azonban nem tekinthetők korlátozó tényezőknek: 1. példa: A fermentáció befejezése után a neomicin tartalmú fermentlevet felmelegítettük 100C°-ra, majd 80C°-ra visszahűtve 1%-nyi szűrési segédanyagot (falisztet és szűrőperlitet) adtunk hozzá keverés közben, és melegen telített oxálsav oldattal 4-es pH értékre savanyítottuk. Fél órai kevertetés után a pH-t tömény ammónium-hidroxiddal 7,0-7,2 közé állítottuk vissza. Ismét fél órás kevertetés után a pH-t melegen telített oxálsav oldattal 2,0-2,5 közé állítottuk, majd 60 C°-on kiszűrtük a mycéliumot. Az így nyert savanyú szűrtlé 4645 gamma/ml neomicint és 11900 gamma/ml színanyagot tartalmazott, illetve 1 cm-es küvettában mért extinkciója 2,410 volt. A továbbiakban megadott extinkciós 5 értékeket szintén 1 cm-es küvettában mértük. A fenti neomicin tartalmú savanyú szűrtlé 500 literes részletét 60 C°-ra felmelegítve átvezettük két sorbakapcsolt ioncserélő oszlopon, melyek egyenként 25-25 liter - előzőleg aktív formába 10 hozott - WOFATIT EZ színtelenítő gyantát tartalmaztak. Ezután ugyancsak 40 liter/óra sebességgel, — kénsawal pH = 2,5-re savanyított ionmentes vízzel — kimostuk az oszlopokból a neomicint. így olyan derített levet kaptunk, melynek extinkciója 15 0,217 volt, és színanyagtartalma az eredeti savanyú szűrtléhez viszonyítva 86,5%-al csökkent. Ezt a derített savanyú szűrtlevet 10 liter tömény ammónium-hidroxiddal pH = 8,5-re állítottuk be (extinkció: 0,315), majd két sorbakapcsolt, egyenként 20 10-10 liter, —előzőleg NH+ 4 -ciklusba hozott WOFATIT CP kationcserélő gyantát tartalmazó — ioncserélő oszlopon vezettük keresztül, lebegőágyban, 40 liter/óra sebességgel. A gyantaoszlopok a derített neutrális szűrtlé neomicin tartalmának 25 94,6%-át megkötötték. Az ioncsere után a gyantaoszlopokat ionmentes vízzel kimostuk a fermentlétől, és a megkötött neomicint 1%-os ammónium-hidroxiddal ehiáltuk. így olyan eluátumhoz jutottunk, amelynek extink-30 ciója: 0,515 volt és 2104g neomicint tartalmazott. Az eluátumot vákuumban bepárolva ammóniamentesítettük, majd 10 n kénsawal pH = 2,0-re savanyítottuk. 30 perc kevertetés után a pH-t visszaállítottuk dietil-aminnal 5,1-re, és hirtelen felmelegítettük 35 60 C°-ra. Extinkció: 1,410. Ezután 420 g NORIT-A aktívszenet adtunk az oldathoz, mintegy 8 részletben, állandó keverés közben, az oldat hőmérsékletének konstans értéken tartása mellett, mintegy 40 percen keresztül. A 40 szenes oldatot melegen SEITZ K-5 lapon szűrtük, majd 15C°-ra visszahűtöttük, és így 37 liter 0,025 extinkciójú oldatot kaptunk, amely 1880 g neomicint tartalmazott, szénnel történő derítés után metanollal történő kicsapással dolgozzuk fel. alatt 43 kicsaptuk, majd még 30 perces kevertetés után a csapadékot kiszűrtük, metanollal mostuk, és 60 C°-on vákuumszárítószekrényben szárítottuk. A kapott termék súlya: 1860g volt. Ezt a nyersterméket állandó keverés közben 50 feloldottuk 5200 ml desztillált vízben. Oldás után az oldat extinkciója: 0,355 volt. Az oldatot felmelegítettük 60C°-ra. A hőmérséklet állandó értéken tartása mellett, — intenzív keverés közben — 180 g NORIT-A aktívszenet adtunk az oldathoz, mintegy 55 8 részletben, kb. másfél óra alatt, majd még 15 percen keresztül tartottuk az elegy hőmérsékletét 60 C°-on. Ezután a szenes oldatot melegen sterilre és szálmentesre szűrtük és visszahűtöttük 15 C°-ra. Az £0 oldat extinkciója: 0,036 volt. 26 liter, — előzőleg sterilre és szálmentesre szűrt, 15 C°-os metanolban — intenzív keverés közben a fenti oldatot 30 perc alatt kicsaptuk. A kicsapás után még 30 percig kevertettünk, majd a 65 csapadékot kiszűrtük, friss metanollal átmostuk és
