162875. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-tirozin-O-szulfát-csoportot tartalmazó peptidek előállítására
162875 10 ba öntjük. A kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk, és megszárítjuk, ip ml 95%-os etilalkoholból átkristályosítva és vákuumban megszárítva 229 mg cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspontja 198—200 C. c) L-Alanü-O-szulfáto-L-tirozü-L-metionil-glicil-L-itriptofil-L-metdonil-L-aszparagil-L-fenilalanin-aimid 224 mg (0,2 mmól) terc-butoxikarbonil-L-iala,nil-L-tiT, ozál-L-metionil-glicil-L-ta , iptofil-L-meitio-nil-L^aszparagil-L~fenilalanin-amidot feloldunk 12,8 ml száraz dimetilformamid és 12,8 ml, nátriumihidroxidról frissen desztillált piridin elegyében. Az oldathoz hozzáadjuk 640 mg piridinszulfátnak 12,8 ml dimetilfortmamiddal készült oldatát. A kapott oldatot 17 óra hosszat szobahőmérsékleten tartjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot több ízben 15—15 ml vízzel mossuk, és vákuumban megszárítva 223 mg reakcióteíimékiet kapunk. Ezt a nyers terméket 20 percig 5 ml trifluorecetsawal reagáltatjuk. A savat vákuumban eltávolítjuk, és a kapott ítrifluoracetátot dietiléterrel digeráljuk, majd megszárítjuk. A nyers oktapeptid-szulfátot 0,1 mólos ammóniumkarbonát oldatban oldjuk, és DEÁE-Sephadex A—25 oszlopon kromatografálva tisztítjuk. Az 1,5 cm átmérőjű és 15 em magas oszlopot összesen 350 ml 0,1 mólos és 350 ml 1,5 mólos vizes ammóniumkarbonát oldatokból készült lineálisan növekvő koncentrációjú elegyefckel eluáljuk, 7 ml-es frakcióikat gyűjtünk, és azokat 253 m/A-mál észlelhető ultraibolya elnyelésre vizsgáljuk. Az 55—77. frakciókat egyesítjük, és liofilizálva 16 mg terméket kapunk. Ultraibolya spektruma (0,1 n nátriumhidroxid oldatban meghatározva) ^max 288 m),u (s 5590). R/-értéke 0,68. Aminosav-összetétele (savas hidrolízissel megállapítva): Asp (1,04), Gly (1,0), Ala (1,16), Met (1,95), Tyr (1,3), Phe (1,3). 5. példa: L-Aszparagil-O-szulfáto-L-tirozil-L-metilonil-glicil-L-triptofil-L-metilonU-L-alanil-L-fenilalanin-amid a) terc-Butoxikarbonil-L-alandl-L-fenilalanin-amid 37,1 g benziloxikarbonil-L-fenilalanin-aniidnak 390 ml 80%r-os ecetsavval készült oldatához hozzáadunk 1,8 g 10%~os palládiumszenet, és a szuszpenziót hidrogénataoszférában 22 óra hosszat keverjük. A katalizátort kiszűrjük, és a szűredékert; vákuumban bepároljuk. A olajos maradékhoz 100 ml etilaoetátat adva az L-ferolalamn-arnid-acetátot kicsapjuk. 448 g L-fenilalanin-amid-acetátnak 30 ml dimetilformamiddal készült oldatát 2,8 ml tóetólaminnal meglúgosítjuk. Az oldathoz 6,9 g terc-butoxitoarbonil-L-alanin-p-nitrofenilésztert adunk, és szobahőmérsékleten 6 óra hosszat állni hagyjuk. Ezután hozzáadunk 0,31 g terc-butoxikarbonil-L-alanin-p-tnitrofeiiilésztert, és szobahőmérsékle-5 ten összesen 22 óra hosszat állni hagyjuk, . mire a keverék ninhidrinre negatív lesz. Ezután hozzáadunk. 200 ml etilacetátot, és 100 ml 20i%-os citromsavoldaittal és 4 ízben 100—100 ml vízzel mossuk. A szerves fázist magnézium-10 szulfáton szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. Etilaoetátból átkristályosítva 3,5 g cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspontja 163—164 C°. b) terc-Butoxikarbonil-L-meitionil-L-ialanil-L-fenilalanin-amid Az a) szakaszban leírt módon kapott 10,3 g 20 védett dipeptidet feloldunk 45 ml triiíluorecetsavban. Szobahőmérsékleten való 15 perc állás után a itrífluorecetsav zömét vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot 1 liter éterrel digeráljuk. A kapott szabad amin-trifluoracetátot szű-25 rőre visszük, éterrel mossuk, és vákuumban nátriurníhidroxid fölött szárítjuk. Hozam 10,4 g. 10,05 g így kapott trifluoraeetátnak 90 ml dimetilformamiddal készült oldatához 4,2 ml trietilamint adunk, és az oldatot jégfürdőben hűt-30 jük. A hűtött oldathoz 15,9 g terc-butiloxifcarbonil-L-,metionin-rtriiklérfenilésztert adunk, és az oldatot szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni. Szobahőmérsékleten éjjelen át való állás után további 1,45 g terc-butoxikarbonil-L-meitionin-35 -triklórfenilésztert adunk hozzá, majd 3 óra hosszat állni hagyjuk, mire a reakciókeverék ninhidridre negatív lesz. Áz összes reakcióidő mintegy 19 óra. A reakcióikeverékhez 4,2 ml ecetsavat adunk, és bepároljuk. Az olajos mara-40 dékhoz 200 ml etilacetátot adva a termék gél alakjában kicsapódik. Vízfürdőn felmelegítve majd lehűtve a cím szerinti védett tripeptád kikristályosodik. 300 ml forró vízmentes alkoholból átkristályosítjuk. 46 c) terc-Butoxikarbonil-L-triptofil-L-metionil-L-alanil-L-fenilanalin-iamid 60 A b) szakasz szerint készült 10,8 g védett tripeptidet feloldunk 50 ml trifluorecetsavban. Szobahőmérsékleten 15 percig való állás után a trifluoreeetsav zömét vákuum'ban eltávolítjuk, és a maradékot 1 liter éterrel digeráljuk. A sza-55 bad amin-trifluoríacetátot szűrőre visszük, éterrel mossuk, és vákuumban nátriumhidroxid fölött szárítjuk. Hozam 11,8 g. A 11,8 g trifluoraeetátnak 75 ml dimetilformamiddal készült oldatához 3,4 ml trietilamint adunk, és az olda-60 tot jégfürdőben' lehűtjük. A hideg oldathoz 13,1 g terc-buJtoxikarbonil-L-triptofán-triklórfenilésztert'adunk, és szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni. Hat órai állás után további 0,595 g terc^butoxikiarbc«il-L-triptofán-triklórfenilészr: 65 tért adunk hozzá, és éjjelen át szobahőmérsék-5
