162875. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-tirozin-O-szulfát-csoportot tartalmazó peptidek előállítására

11 162875 12 léten tartjuk. Összesen 22 óra. múlva 3,4 ml' ecetsavat adunk hozzá, és bepároljuk-. Az ola­jos maradékhoz 200 ml etilacetátot adunk, majd a terméket 75 ml éterrel kiesapjuk. A gélszerű csapadék kristályossá válik. A kristályos ter­méket szűrőre visszük, éterrel mossuk, és leve­gőn megszárítjuk. 100 ml forró vízmentes eta­nolban oldjuk, forrón szűrjük, és az oldatot lassan szobahőmérsékletre hűtjük. A kivált kris­tályokat szűréssel elválasztjuk» és levegőn meg­szárítjuk. d) terc-Buitoxikarbonil-glicil-Li-'triptofíl-L­-mertionil-L-ialaníl-L-feiniknialíri-amid Ac) szakaszban kapott 7,5 g védett tetra­peptidet hiitrogénatmoszférában 30 ml trifluor­ecefeavban oldjuk. Szobahőmérsékleten való 15 perces állás u*äih ä trifluorecetsav zömét vá­kuumban eltávolítjuk,, és a maradékot 1 liter éterrel digeráljuk:: A szabad amiri^trifluoracetá­tot szűrőre.visszük, éterrel mossuk, és vákuum­ban nátriumhidroxid fölött szárítjuk. Hozam :7,98 g. A 7,98 g trifluoraoetátnak 40 ml dimetil­formamidcial készült oldatához 1,8 ml trieitil­amint adunik, és jégfürdőben lehűtjük. Ezután 4,72 g terc-butilpxikarbonil-glicin^nitrofenilész­tert adunk hozzá, szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni, és éjjelen át állni hagyjuk. A reak­ciókeverékeit bepárolva olajos maradékot ka­punk. Az így kapott peratapeptidet 150 ml etil­acetáttal kicsapjuk. A terméket szűrőre visz­szük, és levegőn megszárítjuk. Forrásban levő metanolból átkristályosítjük. Hozam 5,2 g. Ol­vadáspontja 190—192 C°. e) íterc-Butoxikiarbbnil-L-imeitionil-glicil-L­-tríptofil-L-metionil-L-alanil-L-fenilalanin­-amid A d) szakasz szerint kapott 5,2 g védett penita­peptidet nitrogénatmoszféraban feloldjuk 21 ml trifluorecetsavbán. Szobahőmérsékleten való 15 perces állás után 800 ml étert adunk hozzá, és a kivált csapadékot szűrőre visszük, és vá­kuumban megszárítjuk. Hozam 5,3 g. Az 5,3 g így kapott itrifluoracetát 21,6 ml dimetilform­amiddal készült oldatához 1,02 ml trieitilamint adunk, és jégfürdőben lehűtjük. Ezután 3,69 g terc-butoxikarboni'l-L-metionil-d>iklórfenilészterit adunik hozzá, és szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni. Négy óra múlva a reakciókeverék semlegessé válik. Hozzáadunk még 0,05 ml tri­etilaminit, majd további 0,165 g terc-butoxikar­bonil-L-metionin-triklórfenilésztert. Éjjelen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, és másnap 0,165 g terc-butoxikarbonil-L-metionin-triiklór­fenilésztert adunk hozzá. Három órával később (összes reakcióidő 23 óra) a reakciókeverékeit vákuumban bepároljuk, és a maradékot 100 ml etilaoetáittal digeráljuk. Ä pasztaszerű terméket kicentrifugáljuk, és 50 ml 95%-os. etilalkohol­ból kikristályosítjuk. Az így kapott hexapepti­det szűréssel elválasztjuk, és vákuumban nát­riumhidroxid fölött megszárítjuk. Hozam 4,5 g. Olvadáspontja 202—204 C°. f) terc-Butoxilkarbonil-L-iaszparagil-L-tirozil-L-5 -metionil-glicíl-L-itriptofil-L-metíonil-L­-alanil-L-fenilanalin-amid Az e) szakaszban kapott 1,0 g védett hexa­pepitidet nitrogénatmoszf érában 10 ml trifluor-10 ecetsavban oldjuk.' Szobahőmérsékleten való 15 perces állás után a reakciókeverékhez ' 200 ml éterit adunk. A kicsapódott trifluoracetátot szűréssel elválasztjuk, és vákuumban megszárítr­juk. Hozam 964 mg. 410 mg iterc-butoxilkarbönil-15 -L-aszparagil-L-tirozin-ihidrazidot szobahőmér­sékleten 4 ml dimetilfoirmamidtoan oldunk, és az oldatot szilárd széndioxid^aoeton fürdőben —20 C°-ra hűtjük, őt perc múlva 0,48 ml só­savait adunik hozzá, és a hőmérsékletet 3 percre 20 —15 C°-ra hagyjuk emelkedni. Ezután hozzá­adunk 0,5 ml 14%-os nátriumnitrit oldatot, és 5 perc múlva a hőmérsékletet —25 C°-ra csök­kentve hozzáadunk 1,04 ml N-eitilpiperidint. Az így kapott 685 mg hexapeptid-trifluoraoetátbt 25 3,5 ml dimetUformamidban oldjuk, és hozzá­adjuk a lehűitött hidrazid oldathoz. A reakcióit éjjelen át —50 C°-on lezajlani hagyjuk. Más­nap reggel a felhasznált hidrazid oldat felének megfelelő mennyiségű hidrazid oldatot készí-30 tünk, és hozzáadjuk a reakciókeverékhez. Mint­egy 34 óra múlva a reákciókeveréket az oldat mechanikus keverése közben hozzácsiepegtetjük 150 ml 0,2 n ecetsavhoz. A kicsapódott termé­ket centrif ugatással elválasztjuk, és vákuum-3S ban nátriumhidroxid fölött szárítjuk. Hozam 790 mg. Olvadáspontja 204—205 C°. g) L-Aszparagil-O-iszulfáto-LHtirozil-L-metionil-40 -glicil-L-itriptofil-L-metLonil-L-alanil-L. -fenilalanin-amid Az f) szakaszban kapott 750 mg terc-butoxi­karbonil-L^aszparagil-L-<tirozil-L-rnietionil-glicil-45 -I^triptofil-L-metionil-L^alanil-L-fenilalainin­-amidoit feloldjuk 21 ml vízmentes dimetilformw amid és 21 ml frissen desztillált piridin elegyes­ben. Az oldathoz hozzáadjuk 954 mg piridin­szulfátnak 21 ml dimetilformamiddal készült 50 oldatát. A kapott oldatot 17 óra hosszat szoba­hőmérsékleten itartjuk. majd vákuumban be­pároljuk. A száraz maradékot több ízben 15—15 ml vízzel mossuk, és vákumuban megszárítjuk. Hozam 344 mg. A nyers oktapeptid^zulfátot 55 0,1 mólosvizes ammóniumkaijbonát oldatban oldjuk, és DEAE-Sephadex A—25 oszlopon kro­maitografálva tisztítjuk. Ultraibolya spektrum: /•max 287 m^ (« 3830). R/-értéke 0,75. Amino* sav-összetétele (savas hidrolízissel meghatározr 60 va): Aso (1.0), Gly (1,0), Ala (0,95), Met (1,85), Tyr (1,08), Phe (1,04). Az 1—5. példákban kiindulási anyagokként használt isimert vegyületek előállítása a kövefr-65 kező közleményekben van részletesen leírva: 6

Next

/
Thumbnails
Contents