162857. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, lassú hatású alfa- és béta-glükopropteidek előállítására mikróba-tartalmú oldatokból vagy szuszpenziókból
162857 9 10 tikulo-endoteliális rendszert és nagymértékben növelik a szervezet védekezőképességét. Az így előállított gyógyászati készítményeknek gyors antigén hatása is van és ennek következtében növelik a szervezetnek mikroba támadással szembeni ellenállását. E készítmények gyulladást csökkentő hatásuk következtében jól felhasználhatók oszteo-artikuláris panaszok kezelésénél, a légzőrendszer fertőzéseinél, a légutak krónikus gyulladásainál, a felső légutak infekcióinál, venopátia ellen és a flebológiában, mindazon panaszok kezelésére, melyek a genitalis vagy urinális rendszer infekciójából származnak. E tulajdonságaik révén jól használhatók a bőrgyógyászatban is. E készítmények antigén tulajdonságaik révén alkalmazást nyerhetnek bronhitisz, dermatitisz és égések kezelésénél, az urogenitális rendszer mikróbás fertőzéseinél és a sztomatológiában is. A készítmények gyulladás-ellenes és antigén hatása különösen kedvező az oszteo-artikuláris panaszok kezelésénél, ahol a gyulladásokat gyakran kíséri egy autolízises fázis is, melynek következtében a szervezetben túlérzékenység lép fel. A stabil a- és /?-glükoproteideket tartalmazó gyóp, aszati készítmények injekció formájában V .ülnek forgalomba, alkalmazásuk történhet italánosan vagy lokálisan. Kiszerelhetők perkutan, pulmonáris vagy nyálkahártyán keresztül történő bevitelnek megfelelően, pasztillák formájában alkalmazhatók nyelv alá helyezve, vagy belsőleg. Az alkalmazandó készítményt a szokásos gyógyszerészeti kiszerelési technikával állítjuk elő, így készíthetők pl. kenőcsök, orrcseppek, fülcseppek, injekciózható oldatok, liofilizált steril porok injekciók céljára, nyelvre vagy nyelv alá helyezhető pasztillák, aeroszolok, szuppozitóriumok vagy ovulumok. E készítmények általában a stabil a- és /?-glükoproteidek oldatából állnak, melyben a víz oldószeren kívül még különböző vivőanyagok, adhéziót elősegítő anyagok, emulgálószerek vannak, melyek elősegítik a kívánt gyógyászati hatás elérését. Szükség esetén a termékhez még olyan anyagokat is adhatunk, melyek elősegítik a szöveteken keresztüli diffúziót; ilyenek pl. egyes poláris oldószerek. A kiszerelés lényegében a felhasználási mód függvénye. A következőkben néhány példán mutatjuk be a találmányunk szerinti eljárást. A példákban szereplő adatok semmilyen módon nem korlátozzák a találmány terjedelmét. 1. példa: Glükoproteid-frakciö előállítása mikroba-oldatból kiindulva. 10 az sldat literenként az alábbi koncentrátumot tartalmazza: Pneumococcus-ok , 109 /cm 3 Streptococcus-ok 109 /cm 3 Micrococcus catarrhalis 109/cm 3 Staphylococcus -5.X108/cm 3 Klebsiella pneumoniae 5X10 8/cm 3 Haemophilus influenzae 5 X108 'cm 3 Az oldathoz nátrium-mertiolátot adunk.- é^> vákuumban bepároljuk szirupsűrűségig. A sűrítmény térfogata kb. 160 cm3 . E sűrítményt 5-ször extraháljuk azonos ter-15 fogatú jéggel hűtött acetonnal. Az exfrahálasoír után visszamaradt nem oldódó részt Soxhíef.-extraháló-hüvelybe helyezzük. A maradék r»' ezután 8 órán keresztül extraháljuk forró uo tonnái Soxhlet-készülékben. Az acetonos -v \U~. 20 hálás után az extrahálást etiléterrel folyi^cjjl-Az így kapott maradék teljesen zsírtalan é. U; 20—30 g-ot nyom. Kivesszük a papírhü\'?lylv és 37 C°-on megszárítjuk: A száraz anyagm desztillált vízben vesszük fel, kb. 20 s%-os oí-25 datot készítünk. Az oldatot lehűtjük +4 C°-ra és ezen a hőmérsékleten tartjuk 24 órán keresztül. Az oldatból kristályos üledék válik ki, mely főként nátriumfoszfátból és nátriumszulfátból áll. Az üledéket szűréssel elválasztjuk a 30 felette levő oldattól. A leszűrt oldatot ezután féhérjementesítés céljából 30 percig 100 C°-on tartjuk. A kicsapódott proteideket centrifugálással elkülönítjük. 35 A centrifugált tiszta oldat lényegében a glükoproteid frakcióból áll, melyet etanol és aceton egy-egy arányú keverékének hozzáadásával csapunk ki. A keverék hozzáadásakor pelyhes csapadék jelenik meg, a pelyhek kialakulására 65 40 perces időt adunk. A csapadékot centrifugálással elkülönítjük és 37- C°-on megszárítjuk. Az így kapott maradék súlya 2—4 g, tartalmazza a glükoproteid-írakciót. A glükoproteid-frakciót tisztítása végett fel-45 oldjuk annyi desztillált vízben, hogy 20%-os oldat keletkezzék és ezt desztillált vízzel szemben dializáljuk. • Az így tisztított oldatot liofilizálással víztelenítjük. A megtisztított frakció súlya ekkor 50 1,4—1,5 g. A vizes oldatM Sephadex Q 200-as oszlopon szűrjük át és olyan oldattal eluáljuk, melyet pH = 8-ra pufferoltunk. Ily módon 0,15 g igen tiszta glükoproteid-írakcióhoz jutunk. E frak-55 ció stabil a- és ^-glükoproteidekből áll, melyek 4—20°/0 hexózt tartalmaznak szénhidrát komponensként. A biuretreakciót adó komponensek mennyisége, összehasonlítva a tiszta szérumalbuminnal, mint vonatkoztatási alapanyaggal, 60 10%-nak adódik. 2. példa: Az oldat előállításánál többfajta mikroba- Glükoproteidekt előállítása Klebsiella pneumokultúrából származó telepből indultunk ki és 65 niae kultúrából kiindulva.
