162857. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, lassú hatású alfa- és béta-glükopropteidek előállítására mikróba-tartalmú oldatokból vagy szuszpenziókból
7 A kísérő prateidektől való megtisztítás történhet fizikai vagy kémiai eljárásokkal, A proteidek elkülönítésére az oldat pH-ját 5 körüli értékre állítjuk be, pontosabban 5 és 6 közé. A proteádmentesítés ezután egyszerű melegítéssel, kifagyasztással, oldószerek hozzáadásával vagy biokémiai megbontással történhet. Jelen esetben a hűtéssel való proteidimentesítést tartjuk előnyösnek. Az oldatot 0 C8 körüli hőmérsékletre állítjuk be, ekkor az oldott ásványi sók nagy része és a fehérjék egyidejűleg kicsapódnak. A kicsapódott szerves anyag proteid vagy nukleoprateid, melyet szűréssel vagy centrifugálással különítünk el. A visszamaradó tiszta oldatban különböző glükoproteidek keveréke és kevés ásványi só van oldva. A különböző glükoproteideket ezután szelektíven kicsapjuk oly módon, hogy az oldathoz fokozatosan vízben jól oldódó oldószert, vagy oldószer-keveréket adunk. Erre a célra jól használható äz etanol.és az aceton keveréke, vagy az acetaldehid és a metanol keveréke. A kivált glükoproteideket elkülönítjük, ugyanazon oldószerrel vagy ugyanazzal az oldószerkeverékkel mossuk, majd megszárítjuk. A glükoproteid-frakíció végleges tisztítása szelektív biokémiai eljárással történik, pl. dialízissel, kovasavon vagy cellulózon történő fcromatográfiával, elektroforézissel, ultracentrifugálással, stb. E módszerekkel olyan glükoproteidfrakció állítható elő, mely a kísérő ásványi sók nagy részét tartalmazza, vagy éppen azoktól mentes. A frakció végső tisztítása egy kémiailag módosított cellulóz-oszlopon val§ szűréssel történik, ilyen pl. az etileeliulóz va<?y a dimetilaminoetilcellulóz. Végül megkapjuk a megfelelő szerkezetű és molekulasúlyú frakciót. A glükoproteid-frakciot tartalmazó oldat legcélszerűbb tisztítási módjának jelenleg a Sephadex G 200-as oszlopon való szűrést tartjuk. Az ilyen oszlop egyáltalán nem adszorbeálja az aktív frakciót és ennélfogva azt szelektíven el lehet választani. Az átszűrt aktív frakcióban csak kis mennyiségben maradnak szennyező anyagok, pl. ásványi sók vagy nukleoproteidek. E kísérő szennyezések is lecsaphatok mangánsók vagy kvaterner ammóniumsók hozzáa-^,*val, pl. a zefirol vagy a cetavlon. Ezzel a glükoproteid-frakció még tisztább lesz. A je1 en találmány tárgyát képező, az előzőekben leírt eljárással előállított glükoproteid gyakorlaitüag tisztának tekinthető. Beiktathatunk még egy további tisztítási műveletet is, ha szükségesnek tartjuk, de ez nem kötelező. Az eljárás jelenleg előnyösnek tartott kiviteli módjánál a műveleteket a következőképpen definiláljuk: kiválasztunk egy vagy több fajta mikrobatenyészetet a következő fajokból: 8 Diplococcus pneumoniae serotype 5 (n° 573), Diplococcus pneumoniae serotype 2 (n° 53 145), Diplococcus pneumoniae serotype 3 (n° 53 146), Haemophilus influenzae serotype B (n° 5494), 5 Klebsellia pneumoniae (n° 52 145), Diplococcus pneumoniae serotype 1 (n° A 6), Diplococcus pneumoniae serotype 8 (n° 574), Streptococcus pyogenes A (n° 561), Streptococcus C (n»*A 7), 10 Streptococcus G (n° 55120), Neisseria catarrhalis >(n° A 152), Staphylococcus aureus (n° 53 156). A mikrobák testének feloldását felületaktív 15 anyag hozzáadásával végezzük, a mikróbatestek oldásánál antiszeptikus anyagot, pl. szerves higanyvegyületet is használunk, a mikroba-testek oldását több eljárás kombinálásával végezzük, pl. először enZimatikusan 20 oldunk, majd az oldást vegyi eljárással folytatjuk, vegyi oldásnál .felületaktív anyagot és higanytartalmú fertőtlenítő vegyületet is adagolunk, pl. a merkuri-etil-tioszalicilsav nátriumsóját, 25 az oldás időtartama 8 és 15 nap között van, az oldást 40 C° körüli hőmérsékleten végezzük, a lipoidmentesítéshez éteres" extrakciót használunk, 30 a lipoidmentesítéshez acetont használunk, a lipoidmentesítéshez acetaldehid és metanol keverékét használjuk, a lipoidmentesítés teljessé tétele végett újból extrahálunk oxigéntartalmú oldószer fel-35 használásával, pl. acetonnal, a lipoidmentes termék fehérjementesítéséhez fizikai módszert használunk, pl. felmelegítést vagy hűtést, semleges vagy savas közegben, a fehérjementesítést 100 Cu -ra való melegí-40 téssel végezzük, a fehérjementesítést triklórecets avval való megsavanyítással végezzük, a stabil <x- vagy /?-glükoproteidek szelektív elkülönítésére a vizes oldathoz acetaldehid és 45 metanol keverékét adjuk, a stabil «- és /5-glükoproteidek szelektív elkülönítésére a vizes oldathoz etanol és aceton keverékét adjuk, 1 térfogat vizes oldathoz a szelektív kicsapás 50 végett fokozatosan 1—20 térfogat etanol-aceton keveréket adagolunk, a találmányunk szerinti eljárással ily módon előállított stabil a- és ^-glükoproteideket ezután dialízissel tisztítjuk, a dialízishez cellulóz-55 membránt használunk, a tisztítást Sephadex G 200 oszlopon való kromatográfiával folytatjuk és eluálással fejezzük be. 60 A találmány szerinti eljárással előállított stabil a- és ^-glükoproteidek gyógyászati készítmények előállítására használhatók fel. E készítmények immunizáló és gyulladást csök-65 kentő hatással rendelkeznek, stimulálják a re-4
