162831. lajstromszámú szabadalom • Eljárás-kromatografáláshoz alkalmas akrilét illetve metakrilát polimer előállítására
162831 13 Fajlagos gélágytérfogat: 5,3 ml/g (víz); 5,7 ml/g (metanol). Kizárási határérték: (enzimek és peptidek segítségével meghatározva): 1 000 000. Acetil-tartalom: 0,8 s%. 7. példa: 14 "d) A 8.a) példa szerint kapott gél 30 g-ját 75 ml tetrahidrofurán és 75 ml In vizes nátronlúg keverékében 3 órát kevertetjük szobahőmérsékleten. A szokásos feldolgozás után kapott gél acetil-tartalma: 14,2 s%. ömlesztett súly: 1,4 ml g. Gélágytérfogat: 3,3 ml/g (THF); 3,0 ml/g (metanol); 2,3 ml/g (víz). a) 20 g polivinilpirrolidon, 5 g dinátriumhidrogénfoszfát és 0,30 g nátriumdihidrogénfoszfát 1000 ml vizes oldatához hozzáadjuk 202,5 g 2-acetoxietil-metakrilát, 22 > 5 S etilénglikol-bisz-metakrilát, 275 g toluol és 1 g azo-izobutirodinitril keverékét, A polimerizálást és feldől- 15 gozást a 6.a) példa szerint végezzük. Termelés: 85% gyengén homályos gyöngyök. ömlesztett súly: 1,7 ml/g. Fajlagos gélágytérfogat: 5,3 ml/g (THF). Kizárási határérték (polistirolok segítségével 20 meghatározva THF-ben) 40 000. 2-acetoxi-etil-metakrilát helyett 2-(2-acetoxi)-etoxietil-metakrilátot alkalmazva olyan termékhez jutunk, amelynek gyakorlatilag azonosak a jellemzői: 25 ömlesztett súly: 1,8 ml/g. Fajlagos gélágytérfogat: 5,8 ml/g. (THF.) b) A 7.a) példa szerint előállított gél 50 g-ját elszappanosítjuk az l.b) példával analóg módon. * 30 Termelés: 41,8 g. ömlesztett súly: 1,5 ml/g. Fajlagos gélágytérfogat: 5,0 ml/g (víz). Kizárási határérték (enzimekkel és peptidekkel meghatározva): 80 000. 35 '8. példa: "j B: felhasználás a) 6 g polivinilpirrolidon, 8 g dinátrium-hidrogénfoszfát és 0,35 g nátriumdihidrogén-foszfát 1200 ml vizes oldatához hozzáadjuk 240 g, 2,3--diacetoxipropil-metakrilát, 60 g etilénglikol-bisz-metakrilát, 100 g n-oktanol és 2 g azo-izobutirodinitril keverékét. A polimerizációt és feldolgozást a 6.a) példa szerint végezzük. ömlesztett súly: 1,33 ml/g. Gélágytérfogat: 2,8 mVg (tetrahidrofurán); 2,6 ml/g (metanol); 1,6 ml/g (víz). b) A 8.a) példa szerint kapott gél 30 g-ját 150 ml 50%-os vizes metanollal, amely a sztöchiometriái mennyiségű káliumihidroxidot tartalmazza, 3 órát keverjük szobahőmérsékleten. A szokásos feldolgozás után a kapott hidrofil gél acetil-tartalma 0,6 s%. ömlesztett súly: 1,33 ml/g. Gélágytérfogat: 1,8 ml/g (tetrahidrofurán); 3,2 ml/g (metanol); 3,0 ml/g (víz). c) A 8.ía) példa szerint kapott gél 30 g-ját 150 ml In nátronlúgban 3 órát keverjük. A szokásos feldolgozás után kapott gél acetil-tartalma 18,3 s«/0 . ömlesztett súly: 1,45 ml/g. Gélágytérfogat: 3,2 ml/g (tetrahidrofurán); 3.0 ml/g (metanol); 2,0 ml/g (víz). 40 45 50 fiO 1. példa: Proteinek elválasztása magas kizárási határértékkel rendelkező gélen Az A, 6,b) példa szerint előállított gélt pH 5-ös foszfát-citrát-pufferben duzzasztjuk éjszakán át. A gélt ezután a szokásos módszerek valamelyikével egy kb. 600 mm hossz* és 11 mm átmérőjű oszlopba töltjük. A kromatografálandó proteineket feloldjuk 0,5 ml pufferoldatban és az oszlopra öntjük. Az eluálás az említett puff érrel történik, 18 ml óra sebesség mellett. Az eluátum regisztrálását a szokásos módon végezzük az UV-abszorpció mérésével, az eluálási térfogat függvényében, Eluálási térfogatok: Glutamát-dehidrogenáz, Mw Lipoxidáz Mw RNÁ-z Mw Tirozin Mw A gél kizárási-molekulasúlya enzimek/proteinek szempontjából 1X106 körüli érték. 2. példa: Poliglikolok elválasztása alacsony kizárási határértékkel rendelkező gélen Az A, 3.b) példa szerint előállított gélt a B, 1. példában leírtaknak megfelelően duzzasztjuk és beletöltjük 9 mm átmérőjű és 600 mm hoszszú oszlopba. Az oszlopot hozzákapcsoljuk egy készülékhez, amely lehetővé teszi a kromatografálandó anyagok meghatározását differenciálrefraktométer segítségéveb A poligliko lókat foszfát-citrát-püíferben oldjuk (10 mg/ml). A készülékbe esetenként 30 jul-t injektálunk. Az eluálást az említett pufferrel végezzük. 1 000 000 20 ml 102 000 30 ml 13 000 35 ml 182 45 ml 55 Eluálási térfogatok: Poliglikol 20 000 17 ml Poliglikol 6 000 17 ml Poliglikol 4 000 16,5 ml (a görbe főcsúcsa) Poliglikol 1500 22 ml Poliglikol 1000 24 ml Poliglikol 400 27 ml Etilénglikol 62 34 ml 65 A poliglikolok kizárási-molekulasúlya: 4500. 7
