162730. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oleandomicin kinyerésére permentlevekből, egylépéses extrakcióval
3 162730 4 ktaroformmial. végzett extrakció hatásfoka növelhető, ha a ferrnentléből a niicéiiuim kiszűrését ásványi savval történő savanyítás után pH= =15,5 értéken végzik. A felsorolt eljárások hátránya, abban rejlik, hogy anyagigényesek, valamint munkaigényesek, émelljeittt Msmértékiben hatékonyak, ment a végső (tiszta tennék hozama viszonylag alacsony, ami annak a következménye, hogy a kinyerési folyamatok isjok lépésiből állmaik. Az oleandomycin kinyerésére irányuló kísérleteink során olyan eljárás kidolgozását tűztük ki célul, mely a hatóanyagot tartalmazó jó. minőségű terimék előállítását az eljárás lényegéből fakadóan, egylépéses lextrakoióval, az eddig ismert eljárásoknál íjobb kitermeléssel valósítja meg» • E cél érdekében az oleandomycin szűrtievek azon színező- és szennyezőanyagainak beható vizsgálaittát végeztük el, melyek az organiikus oldószerrel végzett extrakaiót nagymértékiben zavarj;ák és a kapott extraktot is szennyezik. Megállapítottuk, hpgy az oleanidotmioin fermentlievek olyan zsír-, és olajsavakat, illetve ezek származékait, valaiírűntHhiahzásigátlóként alkalmazott olajmiaradványoikat, és a bdoszkiitézis isorán keletkezett egyéb — pontosam nem definiálható — komponenseket tartalmaznak, amelyeknek kémiai tulajdonságai és oldékonysága közel azonos az oleandómioinéivel, ezért egyszeri extrakcióval szétválasztásuk nehéz. A találmány lényege az, hogy az ofeandomicin tartalmú, melegen i(30—70 °C között, célszerűen 50 °C-on), savanyún szűrt fiarmenitlevek, egy lépésben kapott 1—% széniastomiszámú ecetsavHészteres extrakitumát vákuumban való besűrítés előtt és/vagy után pH F= 9,0^as pufferrel keverijük ki, és a vízmentesített, aktív szénnel derített oldatot az oleairadowMűin bázisra számított ekvivalens mennyiségű biostapószerrel reagáltatjuk, maijd ismert módon dolgozzuk fel. Az extrakció .szempontjából memkívánatos anyagok jelentős részié eltávolítható azon felismerésünk alapján, hogy az oleandoimiidn tartalmú fermenitlevet 10%-os vizes oxálsav oldattal pH t= 3,0—3,5 éritékre történő savanyítás után melegen, 30—70 °C között — célszerűen 50 °Cnon kell miegiszűrni a miiaéliumtól. Ugyanis ezen a pH értéken és 'hőmérsékleten a különféle típusú szennyező anyagok nagyobb része már koagulál, s így a micéliiummal együtt kiszűrhető. 'Az ily módon kapott éles savanyú szűrtilevekből az 1—5 széniatomszámú ecetslav^észterrel (metil-iaicetáittal, etiliacetáttal, i^propil-acetáttal, i-buifcil-aoetáttel, nnbutü-uioetátlial, i^aimil-laoetáttal, vagy n-^amilMacetáittal) végzett oldószeres extraíkcdó jobb hatásfokú, s a kapott oldószeres extrakt gyakorlatilag már alig tartalmaz szín-,' és szennyezöanyagokait. A jelen eljárás szeriinit az organikus extrakt esekély szín- és szennyezőanyag tartalma is eltávolítható, ha azt besűrítés előtt és/vagy besűrítés után valamely pH = 9,0 értékű puff érrel, 5 célszerűen dinátrium-lhidirogén-foszfát 0,11 M-os vizes oldatával keverjük ki. \ Ha a fcikevierés a besűrítés előtt történit. 1 10 ítérfiogiatrész foszfát puffer alkalmazásával, úgy az oldószeres fázist 40°C -alatti hőmérsékleten 0 azeotróp desztlllációval sűrítjük be az optimális koncentráció eléréséig, majd a sűrítményt vízmeniteaire szárítjuk izzított nátrium-szúlíiáttal történő kezeléssel. Amennyiben az V2 •térfogatrész puff érrel történő kikeverést a már előzőleg bekoneenitrált oldószeiras fázissal végezzük, akkor hasonlóan víztelenítjük, majd a haitóanyagtaritalamniak ímiegíelelő ,1%-nyi mennyiségű aktív szénnel derítjük. A'«zenes derítés után kapott tiszta', oldatlból az oleandömicin bázisra számított ekvivalens mennyiségű; kfcsapósaeirként használatos ásványi savval, célszerűen foiszforsawal csapjuk ki az olearadomiöin-foszfátot. 5 Az eljárás' előnyeként megemlítjük, hogy az olöapdomicin és a kísérő, zavaró hatású, anyagok egytóástől való szétválasztása során 'oly nagymértékű [tisztulás áll élő, hogy az így kapott oldóiszeres exftrafct már egy lépésben biztosítja, jobb kitermeléssel, azt a minőségű terméket, amelyet az eddiig ismiert kinyerési eljárások csak háromlépéses extraíkicióval tudtak imsgvalósíitaini. Az eljárás további előnyeként jelentkezik még az, hogy az általunk felismert itisztítási eljárások alkalmazása gyakorlatilag elhanyagolható veszteséget okoz a feldolgozás folyamán, így a kinyerésre fordított idő, és egyéb más műszaki feltételek csökkentesével az oleámdomioin kiibzaitál — bármilyen; titerű fermentléből kiindulva — szűrtlére. számítva mintegy 8Ó%i-os, amely mintegy ;15%-kal jobb a 238,099 . sz. szovjet szabadalmi leírásiban közölt kihozatalinál. • • ; . :• •.,.. •- •. •Elljáráisunk további részlateit az ,aJábbi példákbanlanjertetjük anélkül, hogy találmányunkat á példákra korlátoznánk. 1. példa/ • '"•; , Az oteandómiiairi fernaenitlé' pH-ját keverés közben lO^/o-os vizes oxálsav oldattal pH — 3,0— 55 3,5 értékre savanyítottuk te.ilß—-120"°C-on, majd i2P/fll jperliit szűrési segédanyag «hozzáadása után 50: -? C-m felmelegítve szűrőprésen élésre szűrtük. Az így kapott savanyú szűrtlé oleandomycin tartalma 3800 y/ml volt. 60 Az oleandomioin tairtalhiiát biológiai és kémiái, értéklméréssel haitároztuk mag. A biológiai értékmérés lyukasztásos, agar-^diffúziós módszerrel történt, teszlrtorganiizmusként Bacillus su'btáiliis: ATCC 6iÖ33Hat használva. A kémiai ér-65 tékméréat koloriimietrikús módszerrel végeztük
