162171. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a szérum kalciumtartalom csökkentésére képes hormonszerű szer előállítására
5 162171 6 8. Az alábbi táblázat foglalja össze a fenti termékek korong-elektroforézissel meghatározott relativ elmozdulási értékeit, (a termékeket a 7. példa szerinti eljárással állítottuk elő): 5 9. Ha a találmány szerinti eljárással készített terméket kísérleti állatnak (him patkánynak) adjuk, a vér kalciumtartalmán kivül a foszfor- és a magnéziumtartalom is csökken. 10. A termék könnyen oxidálható diszulfid-10 kötéseket tartalmaz, e diszulfid-kötések viszonylag erős alkáliákkal szemben nem stabilisak. 11. Fajlagos forgatóképesség a 23 D =-20C° (C = 0,4 %, H2 0) (123/í/mg minta) 12. Vékonyrétegkromatográfia 15 A minta (61 MRC E/mg) Kromatografáló oldószerelegy: .u-butanol: piridin: viz: ecetsav 15 10 12 3 Szorbens: Abisel (védjegyzett név) 20 (Asahi Kaséi Kogyo Kabushiki Kaisha) Előhívó: Daidon Smith-reagens Rf-érték: 0,46 - 0,71 25 Eljárás a hormonszerü anyag extrahálására 1. A nyersanyag a) Az angolna vena cava-jának a nyelőcsőmentén a szív felé haladó, a nyelőcső falához kötődő 30 szakasza. Részletesebben: előnyös a nyelőcsőből egy a szív előtt és a sziv után megfelelő távolságban, pl. mindkét irányban 2-2 cm távolságban levágott darabot kivenni. Ezt a darabot vagy eredeti állapotá-35 ban, vagy zsirtalanitott és szárított állapotban használjuk fel. A zsirtalanitást és a szárítást az állati zsigerek feldolgozásánál szokásos ismert eljárás szerint végezzük. Az eljárás során a fémionok, többek között a kalcium-ionok nyomainak 40 eltávolítása céljából előnyösen etilén-diamintetraecetsavat (a továbbiakban EDTA) tartalmazó acetont használunk. Pl. az angolna fent említett szövetét ugy víztelenítjük, hogy EDTA-t tartalmazó acetonban áztatjuk hosszabb időn át, majd levegőn 45 szárítjuk, és így száraz terméket kapunk. b) Nyersanyagként az angolna szive és szivburokhártyája eredeti állapotában, előzetes kezelés nélkül használható, ill. extrahálható. Előnyös a nyersanyagot szárított termék formájában felhasz-50 nálni. A száritott termék az a) pontban leirt eljárás szerint állitható elő. Az angolnából kapott, a szérum-kalciumtartalmat csökkenteni képes hormonszerü anyag a kalciumtartalmat csökkentő hatását, más szóval az 55 alábbi módszerrel meghatározott kalcitonin-aktivitását a Copp, D. H. és Parkins szerzők '"Parathyroid Hormone and Thyrocalcitonin (Calcitonin)" cimü cikkében (Amsterdam Excerta Medica Foundation, 78^ 1968) közölt adatok alapján összeha-60 sonlitottuk más állatok szekréciós szövetei 1 testsúly kg-ra vonatkoztatott kalcitonin aktivitásával. Az alábbi táblázat szemlélteti az eredményeket. A táblázat adatai azt mutatják, hogy az angolna szekréciós szövetéből extrahált hormonszerü anyag 65 szérum-kalciumtartalom csökkentő hatása, ha azt 3 E (150 Y) 6 mA, 40 perc 6 mól karbamidot tartalmazó savas gél (pH = 4,4) ß -alanin ecetsav pufferoldat (pH =5,0) ponceau-vörös RM.G. =0 ' 5 D (150 7) 6 mA, 40 perc 6 mól karbamidot tartalmazó savas gél (pH=4,4) ß -alanin ecetsav pufferoldat (pH =5,0) ponceau-vörös RM.G. - °' 5 C (150 Y) 6 mA, 80 perc 6 mól karbamidot tartalmazó savas gél(pH=4,4) ß -alanin ecetsav pufferoldat (pH = 5,0) ponceau-vörös RM.G. =°>5 B ( 50 Y) 8 mA, 435 perc 6 mól karbamidot tartalmazó savas gél(pH=4,4) nátriumacetát pufferoldat (pH = 4,7) amido-fekete «M.G. =0,4-0,45 A (100 y) 3 mA, 60 perc standard gél (pH=8,9-9,0) trisz glicin pufferoldat (pH = 8, 6) ponceau-vörös 0 (startpont) M.G. = metilzöld Minta az elektroforézis körülményei: a gél kifejlesztő oldószer szin relativ elmozdulási érték
