162171. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a szérum kalciumtartalom csökkentésére képes hormonszerű szer előállítására
162171 1. táblázat Si.ám Súly (g) Szérum-kalcium hatáserősség tartalom (mg/dl) (MRC-egység) (mirigy) fiatal angolna kifejlett angolna 1 115 13,3 2 159 13,0 3 140 14,2 4 192 11,4 5 200 12,4 6 205 12,8 ^5 •^,3 3,1 5,6 1,5 0,9 2,8 tenyésztésének időtartama (napokban), a szérum kalciumtartalma és a szérum ozmózis nyomása között; a 2. ábra az 1:1 arányban higitott tengervizben tenyésztett angolna (napokban kifejezett) 20 kora ős a szekréciós szövetében lévő, a szérumkalciumtartalmat csökkentő hatású hormon a szövet mennyiségére számított hatáserőssége közötti viszonyt mutatja; a 3-4. ábrák a 70 MRC E/mg hormon-hatáserősségii minta (a KBr-módszerrel 25 felvett)infravörös spektrumát, illetve az UV-spektrumát (199 7) ml minta, A H2 0 = 277 m , /j, max E1% lcm = 8,04) szemléltetik; az 5. ábrán látható görbe egy a 8. példa szerint Sephadex G 75-tel ke- 30 zeit minta aktiv frakcióit szemlélteti. A találmány szerinti eljárással kapott termékek oly polipeptidek, amelyek a tirokalcitoninhoz hasonlóan csökkenteni képesek az emlősök vérében a szérum-kalciumtartalmat. 35 Fenti termékeket fehér por alakjában kapjuk; az alábbiakban összefoglaljuk a termék fiziko-kémiai tulajdonságait: 1. Oldhatóság: Vizben oldódik, szerves oldószerekben oldha- 40 tatlan. 2. A dializáihatóság határainak membránszürőkkel (előállitható: Nihon Shinku Gijutsu K.K.) való ellenőrzése; Átmegy a G 10 T szűrőn (ez a szűrő átengedi a 45 10 000 vagy kisebb molekulasúlyú vegyületeket). Nem megy át a G 10 H szűrőn (ez a szűrő átengedi az 1000 vagy kisebb molekulasúlyú molekulákat). 50 3. A molekulasúly 3000-4500 A molekulasúly meghatározását az alábbi módszerrel Mégeztük: Szarvasmarha szérumalbumin (molekulasúly = = 6700) ős basitracin (molekulasúly = 1423) standard mintákhoz való viszonyítással dolgoztunk. A termékben levő vegyületek molekulasúlyát a Sephadex G-75-ön, G-50-en és G 25-ön végzett gélfiltrálás után a termékből eluált mennyiségek arányának a standard mintákból eluált mennyiségek arányával való összehasonlitása alapján számítottuk ki. 4. Színreakciók A ninhidrin-reakció, a Sakagushi-reakció, a diazotálási reakció és a Crieg-Liebig-reakció pozitív. 5. Precipitálhatóság Precipitálható a fehérjék lecsapatására használatos szerekkel, pl. triklórecetsavval és perklórsavval. 6. Dezaktiválható proteolitikus enzimekkel, pl, nagáz és chimotrypsin enzimmel. Az alábbi körülmények között végezhető a dezakti válás: 1 sr termék 50 sr 0,01 mólos foszfát-pufferoldattal (pH=6,8) készitett oldatát 47 C°-on 2 órán át reagáltatjuk az enzimmel. 7. Az aminosavak aránya 150 7 mennyiségű, 123 MRC E/mg hatáserősségü minta 6 n sósavoldattal 110 C°-on 24 óra hosszat folytatott hidrolízise után: aminosav H mól aminosav alanin Mmol aminosav alanin 0,0760 lizin 0,0636 fél cisztein -hisztidin 0,0041 valin 0,0807 NH3 0,0816 metionin -alginsav 0,0256 izoleuein 0,0312 aszparaginsav 0,0638 leucin 0,0641 treonin 0,0229 tirozin 0,0052 szer in 0,0384 fenilalanin 0,0192 glutaminsav 0,0792 prolin 0,0207 glicin 0,0846
