162027. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vérnyomáscsökkentő hatású vegyület előállítására

9 10 am. um, iiseo, ,1455, 1420, 1,300, 1300, 1270, 1255, 1195, 1170, 1130, 1100, 1050, 1015, 990, 980, 955, 935, 895, 885, 060, 840, 830, 810, 781 cm-1, Az udenon savas tulaj'donságú, így savas oldatból átoldható vízzel nem elegyedő oldószerbe és oldószerből 5—6 pH fölött átoldható vízbe. Anioncseirélő gyantán abszorbeálható; titrálással 'mutatott pK'-értéke kb. 4,il. Az udenon 2,4-dinitroifenilihüdrazinnal, hidroxámsav-ferrikloriddal, tetrazólium-reagenssel pozitív reakciót ad, de iFehling- és Tollensreagenssel nem ad reakciót. Palládium csontszénnel 2 imól hidrogént abszorbeál és C12H20O3 képletű vegyület képződik. Szilikagél vékonyréteg-kiromatográfia alkalmazásával butanolecetsav-víz (4:1:1) futtatóelegyibem az udenon Rí értéke kb. 0,7 és benzol-etilaoetát (3:1) futtatóelegyben az iHf érték kb. 0,1. Az udenon 100 mcg/ml koncentrációban agár táptalajon nem gátolja a következő baktériumok fejlődését: S. aureus, E, coli (K12), S. typhosa, S. dysenteriae, K. pneupmoniae, B. anthracis, B. isubtilis, Mycobacterium 607; glükóz-agár táptalajon a Pyrieularia oryzae, Candida albicans, Saocharomyoes cerevisiae, Penicillium chrysogenum fejlődését ugyancsak nem gátolja. Az udenon 12,5 mcg/ml koncentrációban alkalmazva 5,0 pHnn rizs-tápoldatban termesztett Pyirioulairia oryzae gomba fejlődésére gátló hatást fejt ki. A C|2

Hie0

3

képletű és 75^80 °C olvadáspontú vegyület nem ismert, ezért az udenon új vegyület, mint ahogy azt szerkezete is bizonyítja. A vegyület állatokra alacsony toxicitású. Az udenont desztillált vízben oldva (pH 2,3) és egereken vizsgálva az LD50 érték: intravénás injekcióval ,1138 mg/kg, dntraperitoneális injekcióval 163 mg/kg, szubkután injekcióval 1000 mg/kg és orálisan adagolva 1100 mg/kg. Az udenont desztillált vízben oldva és semlegesítve az LD50 értéke: intravénás injekcióval 1270 tag/kg, dntraperitomeális injekcióval 1310 mg/kg, szuibkután injekcióval 1400 mg/kg és orálisan adagolva 2200 mg/kg. Ha az udenont naponta 160 mg/kg, 40 mg/kg vagy 10 mg/kg dózisban 30 napon át orálisan vagy tatraperitoneálisan adagoljuk, akkor a vérnyomás csökkenésén kívül toxikus hatás r.em figyelhető meg. Az udenonnak a tirozin^hidroxilázra kifejtett hatását a következő módszerrel vizsgáltuk: a reakcióelegy 0,1 ^niól L-tirozin-i4

C-t (1,1 • :105

cpm), 1 juimól !2-aimino-4-hidiroxi-6,7--dimetil-tetralhiidropteridint, 0,1 ml tirazinhidroxiláz oldatot (1 mg protein/ml), 200 t*möí acetát-ipuffert [pH 6,0], 100 ^mól merkaptoetano.lt és ezen ífcívül rendire: 100 meg'ml, 50 mcg/ml, 25 mcg/ml, 12,5 mcg/ml, ill. 0 mcg/ml udenont tartalmaz. A reakeióelegyet 30 °C-on tartva, 15 perc után a 3,4-dÍhiidroxifendlalanin-14C-t alumíniumoxidos Ikromatográfiával elválasztjuk és a radioaktivitást meghatározzuk. Ebben a vizsgálatban a különböző udanonkoncentrációknál a következő gátlása százalékok figyelhetők meg: 100 mcg/ml-nél 74,1%. 50 mcg/ml-nél 57,6%, 25 mcg/ml-nél 39,0%, 5 12,5 mcg/ml-nél 30,6%,. Ez a gátlóhatás 1.10~a mól Fe++

-ion hozzáadásával sem változik. Ha az eredményeket a Lineweavour—Durk egyenlet értelméiben vizsgáljuk, akkor a tiirazinnäl úgynevezett „mem-kompetitiv", a 2-amino-4-10 -hidroxi-i6,7-d!Ímetil-tetrahidr,opteridinnel úgynevezett „kompetitív" viszonyt mutat. Az I. képletű udenon szerkezetet hexánból kristályosítva határoztuk meg. Mint ahogy a 15 szerkezeti képlet mutatja, az ludenom karboxilcsoportot nem tartalmaz, ennek ellenére mégis savas tulajdonságú. Az udenon fémisóinaík képlete I(IC|2HI7

0/

1

)„M

(M jelentése Mni

-ion) és a megadott reakcióegyenlet értelmében I — II — 20 III, ill. IV képlettel írhatók le, ahol Mn+ jelentése fémion, pl. . a Ca++

= M

2

+. A találmány kiterjed az udenon I — II — III, ili. IV képletű formáira is. A tbioszintézis fo-25 lyamán az oudenon a tápoldatbain leginkább a II —III és IV formában van jelen, és ha vízzel nem keveredő oldószerbe extraháljuk, 'akkor a vegyület főleg az I képletű származékká alakul. A találmány magába foglalja 30 nemcsak az I képletű, udenon előállítását a II — III és IV képletű származékokból/hanem a IV képletű udenon előállítását is az I — II és III képletű származékokból, továbbá a II és III képletű udenon előállítását az I és IV 35 képletű formákból. A találmány o^^mi koré kiterjed abázissal képzett udenon-s >'< a és az előállítás eljárásaira is. A találmi-^ --"•-' -u — mint ahogy már leírtuk — a veg. . ós III képletű formáiból az udenon 40 hatók elő. A találmány szerint az udenon OMJ.L... -JÍ fém-iont könnyen szolgáltató szervetlen. ->..gy szerves fémvegyületeket és amennyiben szükséges, vizet adva, az oldószer eltávolításával, 45 Vagy az anyag kristályosításával az udenon sója (IV képlet) állítható elő. így például az ctilacetáthan oldott udenonhoz i2^etilkapronsav-nátrium sót adva, a kicsapódó udenonnátrium sót kristályosítjuk: az udenonhoz — 50 mely vízben a II és III képletű vegyületté alakul [16,0 pH] kálium-ihidrogénkar,bonátot adva, majd a bepárlás megkönnyítésére n-butol hozzáadásával az udenonnkálíum sót kristályosítjuk ki; az udenonhoz — mely vízben a II és 55 III képletű vegyületté alakul [6,0 pH], báriumhidroxidot adva és n-butanollal ibepárolva, a kristályos udenon-<bárium sót képezzük. Az előbbiek szerint — mint ahogy az udenon ultraibolya abszorpciós maximuma mutatja — 60 i(l/15 mól foszfát-pufiferben, pH 7,0-n) és ahogy az alábbiakban leírt sók képletei mutatják — az udenon vízzel reagál és a II és III képletű vegyületek képződnék. így tehát a II • és III képletű vegyületek és racém for-65 máik kémiai szintézissel állíthatók elő. A ta-