162027. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vérnyomáscsökkentő hatású vegyület előállítására
162027 8 butanol-víz: pH 2,0-nél 8; pH S^nál 7,6; pH 4-<nél 4; pH 6-nél 2,5: pH 6nnál ,2,5; pH 8-nál 3; pH 9-nél 0,6.; pH W-né\ 0,8; etilacetát-víz: pH 2,0-snél 5; pH 3-mál 4; pH 4-néi 1,5; pH 5-nél 0,2; pH 6-mál kevesebb mint 0,1; butilacétát-víz: ph 2-nél3; pH 3-aiiál 2,5; pH 4-nél 1; pH 5-mél 0,1; pH 6-nál kevesebb mint 0,1; kloroform-víz: pH 4-nél 19; pH önnél .1; pH 6nnál 0,1... A metil-Tizobutilketon és víz közötti megoszlási együtthatót a tirozkuhidiroxiláz működését gátló aktivitással vizsgáltuk, mely a következő értékeket adta: pH 2-nél 1, pH 3nnál ,1; pH 4-nél 0,i3; pH 5-nél 0,1 és pH 6-nál C,l. Az udenon 2j0 pHnn, Ifi pH-n és 9,0 pH-n stabil, így aktivitása 60 °C-on 30 pere után és 100 °C-on 5 perc után nam csokikén. Az udenon savas, vizes oldatból vízzel nem elegyedő oldószerbe extrahálható, majd az oldatból az oldószer desztillációjával töményíthető be. Az udenon vízzel nem elegyedő oldószerből semleges vagy alkalis vízbe kirázható, mint ahogy azt a megoszlási együtthatók is mutatják. így például az udenon a fermentléből 2—3 pH-n hutanollal, etilaoetáttal, butilacetáttal, kloroformmal, stb. extrahálható. A hatásos extr akcióhoz több , lépcsős extraktor használható. Az extirakeiós eljárásihoz micéliummal együtt az egész fermentlé is felhasználható. Az udenont tartalmazó oldatot desztülációval, vagy csökkentett nyomáson végzett desztillációsai betaményítve szirupot vagy száraz nyers terméket kapunk, melyből az udenon átkristályosítható. Átkristályosítással az udenont fehér kristályos formában kapjuk. Ennél az eljárásnál — amiennyiben szükséges — a fermentlevet szűrjük és a szürletből az udenont az előbbiekben megadott eljárás szerint különítjük el. A szürőlepényből az udenont metanollal, etanollal, acetonnal, etilaoetáttal, butilacetáttal, kloroformmal, stb. végzett extrakdóval különítjük el. Kis mennyiségű udenon kristályosítására hexán vagy hexán-ibenzol az alkalmas oldószer, viszont nagy menynyiség kristályosításaira olyan oldószert használunk, melyben az udenon jobban oldódik, mint amilyen pl. a víz, metanol, etanol, butanol, etilacetát, aceton, benzol és kloroform. Kristályosításra olyan módszer is alkalmazható, amelynél az udenont tartalmazó oldathoz olyan oldószert adunk, melyben az udenon nem oldódik. Amennyiben kristályosításánál az anyag olyan szennyezést tartalmaz, mely a kristályosodást gátolja, akkor az udenont a vízzel nem keveredő oldószerből semleges vagy alkalikus 5 vizes fázisba oldjuk át, majd a megsavainyított vizes oldatot iámét, vízzel nem keveredő oldószerrel extraháljuk. Amennyiben szükséges, az udenon kromatográfiás módszerrel is tisztítható. Így pl. a sziliikagél-kromatográfiás eljá-10 rás alkalmazható módszer, benzol-etilaeetát (1:2) felhasználásával. A találmány kidolgozása során megállapítottuk, hogy az udenon savas tulajdonságú, ezért az udenon extraketiójára és izolálására az 15 anioncserélo eljárás alkalmazható. így pl. ha 310 mcg/ml udenont tartalmazó >1|30 ml fermentlevet ,20 ml Dowex 1 x 12 i(Dow Chemical, USA) klorid-formájú .gyanta-oszlopon engedünk át és ezután az oszlopot desztillált víz-20 zel mossuk, .akkor az oszlopról az udenon 0,2 n HCl-al eluálható. A 2—>9-es számú frakciókban Ifi mg udenon van ,(0,2 n HCl átengedése után az eluátumot 20 g-os frakciókban veszszük le). Az udenon extrakciójára az IRA— 25 400 anioncserélo gyanta (Rohm & Haas, USA) is alkalmazható. Andoncserélő gyantával végzett eljárással a fermentléből ,az udenont több, mint 75%-os termeléssel kapjuk. 30 Az udenon savas tulajdonságánál fogva oldatából is leválasztható. így például az udenon Vizes oldatából réz^-ion hozzáadásával leválasztható. A csapadékot savval kezelve és szerves oldószerrel extrahálva, 'majd az oldő-35 szert bepárolva az udenont nyers vagy tiszta formában kapjuk meg. A találmány szeriint — mint ahogy azt az előbbiekben leírtuk — az udenon elkülöníthető oldószeres extrakciós, abszorpciós és elu-40 ciós, továbbá kiesapásos és desztillációs eljárásokkal. A találmány szerint kapott udenon a következő tulajdonságokkal és biológiai aktivitással ._ rendelkezik: az udenont hexánból vagy benrzol-ihexánból átkristályosítva fehér lemezes kristályok formájában kapjuk, olvadáspontja 77—7i9 °C, bruttó képlete C^HieOs (elemzési eredmények: számított: C 69,21, H 7,74, O 50 23,05; mért: C ©9,5,. H 7,86, O 03,01; C^HieOs meghatározása nagyfeloldású tömegspektrográffal). Az udenon vízben, metanolban, etanolban, propanolban, butamolban, aoetoinban,. metil-'izobutilketoniban, etilaoetátban, hutilaoe-„ tatban, benzolban, kloroformban oldódik; éterben, petroléterben és hexánban nem oldódik. Forgatóképessége: [a]m D — 10, i6° i(0,5%, etanol). Ultraibolya spektruma 1/16 mól foszfátpuff er oldatban (10 mcg/ml) pH 7,0-m, 246 m« 60 hullámhosszon maximumot mutat (Ej^m — = 1000); az oldat '(10 mcg/ml) 0,1 n sósavban két maximumot mutat 221 m," (Ejcm = 625) és 285 m/x (Ej cm t= 9i63) hullámhosszokon; káliumbromid pasztillás módszenrel meghatáro-65 zott infravörös abszorpciós sávok: 3400, 2900, 4
