161900. lajstromszámú szabadalom • Eljárás anti-alfa1-fetoglobulin tartalmú, elsődleges rákos májdaganat diagnosztizálására alkalmas szer előállítására
161900 8 és az anti-ai-fetoglobulin tartás adszorbeált állapotban van. A fent említett diszpergáló közegeik előnyösen a következők: albumin, pepton, zselatin, agar, szaponin, angininsav, poMvinilpirroiidon, poli- 5 foszforsav, szérum és hasonlók. E diszpergálószereken kívül különféle felületaktív szerek használhatók. Kellő hatás elérésére ezeket a szereketvO.l—1 s/tf%-Jhan alkalmazzuk. 10 A diagnózis további megkönnyítésére színezéket adunk a diagnosztizáló szerhez. Erre a célra a fentebb említett színezékek alkalmazhatók, patentkék és tripánkék különösen jó eredményt adnak. 15 Minthogy a találmány szerinti diagnosztizáló szert gyakran hosszú ideig tárolják, célszerű kevés tartósítószert hozzáadni a leírásban már említett szerek közül. Az anti-ai-fetoglabuJán-fhordozó kombinációt 20 előnyösen 0,6—5 s/rtt£i°/o V| égső koncentrációnak megfelelő mennyiségben diszpergáljuk, majd a diszperziót beállítjuk 6,5—8,5, előnyösen 8,2—8,5 pH^ra. Az így kapott diagnosztizáló szer előnyösebb 25 az előbbiekben leírt diagnosztizáló szernél, amelyet ugyanannak az antiszérucmnak egy tartó anyaggal együtt való oldásával és diffúz állapotban való megdermesztésével állítunk elő, különösen annyiban, hogy ez az utóbbi szer rövi- 30 debb idő alatt adja meg az eredményt. A találmány szerinti kétféle diagnosztizáló szer esetében fontos az anti-ai-fetoglobulin tisztított alakban való előállítása a betegség kimutatása érzékenységének fokozására, a hamis po- 35 zitív eredményék előfordulásának csökkentésére és a mennyiségi becslés megbizhatóságának növelésére. Ennék a célnak az elérésére kívánatos a szennyezéseket a lehető legnagyobb mértékben eltávolítani a primer hepatomas beteg has- 40 vizéből vagy szérumából vagy a magzatszéruimból. Amikor egy primer hepatomas beteg hasvizével vagy szérumával vagy magzatszéruimával egy állatot immunizákmk, majd az állatból vért 45 veszünk, a szérumot elválasztjuk a vérmintától, és a kapott antiszérumot normális emberi szérummal keverjük, a következőképpen kell eljárni. A primer hepatomas beteg ihasvizéből vagy 50 szérumából vagy magzatszérúimiból és például azonos mennyiségű fiziológiai sóoldatból álló keveréket hozzáadjuk azonos mennyiségű Freundféle teljes segédanyagos közeghez (gyártja Difco). Emulgálás után ezzel a keverékkel egy álla- 55 tot immunizálunk. Az állat például házinyúl, ló vagy ökör lehet. Különösen előnyös módszer egy házinyúlnak a talpába adott szubkután injekció. Az injekciót időnként megismételjük, és amikor az antitest titer kellő növekedését észleljük, az 60 állatot kdvéreztetjük, és a szérumot elválasztjuk. Az így kapott antiszérumot normális emberi szérummal keverjük vagy a fent említett oldhatatlan immunoabszoribenshez adjuk specifikus antiszérum készítésére. 65 Kívánatos, hogy ennek az antiszérumnak nagy legyen az anti-ai-tfetoglobulin koncentrációja a hepatoma kimutatási érzékenységének fokozása és a hamis pozitív eredményiek előfordulásának osökkenitése érdekében. Ezért jobb eredményeket kapunk, ha az antiszérumot például ammóniumszulfát frakcionálással megtisztítjuk. A fent leírt módszerben, minthogy egy primer hapatomás beteg haavize vagy széruma vagy a magzatszérum különféle szérumfehérjéket, például altoumint, y^globulint stb., tartalmaz az ai-fetoglobulin mellett, az eredeti hasvízzel vagy szérummal immunizált állatokban az anti-cti-fetoglobulin mellett ezeknek a különböze szérumfehérjéknek az antitestei is képződnek. Ennélfogva ezt az antiszérumot nagy mennyiségben normális emberi szérummal kell aihszorbeáltatni. Azonban az ezzel a művelettel kapott anti-ai-fetoglobulin már elég tiszta, és közvetlenül feloldható egy tartó anyaggal együtt vagy dászpergálható közegben a hordozón való adszorbeáltatás után a diagnosztizáló szer előállítására. Előnyös azonban, ha az antiszérumot az abszorpció előtt tovább tisztítjuk. Ebben az esetben .primer hepatomas beteg hasvizét vagy szérumát először fehérjefrakicionálással tisztítjuk, majd a kapott ai-tfetoglobulin frakcióval immunizálunk egy állatot, utána azt kivéreztetjük, majd az így kapott vérmintából elkülönítjük a szérumot. A primer hepatomában szenvedő beteg hasvizét vagy szérumiát vagy magzatszérumot a szokásos szérumfehérje frakcionálási eljárással tisztítjuk. Erre a célra alkalmas módszerek Cohn frakcionáló eljárása, Spiro módosított módszere, ammóniumszuMátos frakcionálás, izoelekferomas frafcaionálás, elektroforézis, membránszűirés stb. Ezek a módszerek egyenként vagy kombinálva alkalmazhatók. Ezután az így kapott ai-fetoglobulin frakciót feloldjuk például azonos mennyiségű fiziológiás sóoldatban, majd hozzáadjuk azonos mennyiségű Freund-féle teljes segédanyagos közeghez (gyártja Diflo) emulgálás céljából. Ezután állatokat immunizálunk az így készült emulzióval. Az állatok például házinyulak, kecskék, szarvasmarhák vagy lovak lehetnek. Különösen előnyösek a házinyulak, mert talpaik alkalmasak szubkután beoltásra. A befecskendezést alkalmas időközökben megismételjük, az antitest titerét állandóan ellenőrizve. Amikor az antitest titere imaximális, a fülvénából miniden második nap vérmintát veszünk. Az antitest titere a befecskendezés után kb. 1—2 héttel éri el a csúcsértéket. Ezután a szórumot elválasztjuk, és kevés normális emberi szérummal vagy annak géljével abszorbeáltatva a kívánt anti-ai^fetoglóbulinf kapjuk. Ennek a találmánynak a végrehajtása során, mint már említettük, csak igen kevés normális emberi szérumra van szükség az anitiszérum abszorfbeáltatására. Például ha a szérumot nem tisztítjuk meg, akkor legalább azonos mennyisé-4
